杉木 SRAP-PCR 反应体系优化与建立

杉木 SRAP-PCR 反应体系优化与建立

作者：侯娜;毛红;王港;龙倩;石扬文;陈波涛

作者机构：贵州省林业科学研究院，贵州 贵阳 550011;黎平县东风林场，贵州 黎平 550001;贵州省林业科学研究院，贵州 贵阳 550011;黎平县东风林场，贵州 黎平 550001;黎平县东风林场，贵州 黎平 550001;贵州省林业科学研究院，贵州 贵阳 550011 来源：西部林业科学 ISSN：1672-8246 年：2014 卷：000 期：006 页码：85-90 页数：6 中图分类：S791 正文语种：chi

关键词：杉木;SRAP-PCR;正交实验设计;反应体系优化

摘要：采用 L16(45)正交实验设计,对杉木 SRAP-PCR 反应体系中 Mg2+、dNTPs、Taq DNA 聚合酶用量、引物浓度及模板 DNA 用量等5个因素进行了优化,并确立了适宜杉木的最佳 SRAP-PCR 反应体系。杉木的 SRAP-PCR最佳反应体系为：反应体系总体积为25μL,含2.0 mmol/L Mg2+、0.3 mmol/L dNTPs 、0.3μmol/L 引物,1.0 U Taq DNA 聚合酶、50 ng 模板 DNA 及1×PCR buffer。各因素对杉木基因组 DNA SRAP-PCR 扩增结果的影响程度不同,其中 dNTPs 浓度影响最大,Mg2+浓度的影响最小。运用杉木单株基因组 DNA 对优化 SRAP-PCR 反应体系进行验证,均获得多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明所确立的杉木 SRAP-PCR 反应体系稳定可靠。