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动物细胞融合实验报告
实验目的
a.了解动物细胞融合的常用方法
b.学习化学融合和电融合的基本操作过程 c.观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化 实验原理
细胞融合是指在自发或者诱导条件下,两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。很多化学试剂,如聚乙二醇(PEG),能诱导细胞融合,改变细胞膜脂质分子的排列,在去除这些物质之后,细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力,细胞膜融合,胞质流通,发生融合。 实验材料和用品 材料:鸡血红细胞
试剂:50%PEG液、0.85%NaCl溶液、GKN液
器材:倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、试管、离心管 实验步骤
a.取1ml鸡红细胞悬液+4ml的0.85%NaCl溶液,进行以下两次离心处理:
1)1000r/min离心2分钟。(去上清液,再加入至5ml的0.85%的NaCl溶液) 2)1000r/min离心2分钟。
b.将上步最后一次的沉降血球(去上清液后,约0.1~0.2ml),加入GKN液至 1~2ml,使之成为10%的细胞悬液。
c.取上述10%的细胞悬液1ml,加入3mlGKN液,混合均匀。
d.取c中1ml+0.5ml50%PEG液,c中0.5ml+0.5ml50%PEG液,c中 0.5ml+1ml50%PEG液,混匀滴片,在常温下2~3分钟后,镜下观察。
实验结果 2、细胞质开始融合(呈哑铃状) 1、两个细胞开始接触
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3、两个细胞核开始融合(椭圆状) 4、细胞融合基本完成
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三组对照实验结论:PEG的比例越高,鸡血红细胞的融合率相对越高。
讨论与结论 细胞融合应用
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