金黄色葡萄球菌定量检测能力验证结果与分析
陆其聪1，2，钟宇思1，2，王立博2，成晓情1，2
【摘 要】采用Baird-Parker（BP）平板计数法、显色培养法分别对金黄色葡萄球菌能力验证的两个样品进行定量检测，考核样品16-K717、16-Y374的菌落数分别为173 000、86 CFU/mL。试验结果由中国检验检疫科学研究院检测中心给予评价，Z值分别为0.68、0.38，都取得了满意结果。结果表明显色培养法比Baird-Parker更适合于金黄色葡萄球菌的定量检测。 【期刊名称】食品研究与开发 【年(卷),期】2017(038)016 【总页数】4
【关键词】金黄色葡萄球菌；定量检测；能力验证
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄球状排列，无芽孢，无荚膜。它属于嗜温性微生物，能在7℃～48℃范围内生长，在水分活度（0.86）和pH值（4.8）相对较低，高盐和糖浓度达15 %及含有二氧化氮的环境中仍能生长。由于金黄色葡萄球菌能在较恶劣的环境中生长，使得它们能在其他微生物不能生长的许多食物中成为优势种[1-3]。金黄色葡萄球菌能产生致病的肠毒素，健康成年人进食约30 g或30 mL含106～107个细胞数所产生100 ng～200 ng毒素的食物即可中毒，其特征是发病突然，来势猛烈，通常在进食1 h～4 h出现临床症状，特点是恶心，呕吐，头晕头痛，腹痛腹泻，重者可引起虚脱和休克。金黄色葡萄球菌毒素引起的食物中毒被认为是全球最常发生的食源性疾病[4]。近年来出现的“超级细菌”耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Stphylococcus aureus，MRSA）被发
现存在于禽类体内，且感染率极高，由金黄色葡萄球菌引起的感染变得日益严重，并成为难治感染之一[5-7]，因而，准确地对食品中金黄色葡萄球菌的定量检测就显得尤为重要。
为了提高检测能力和水平参与了中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织和负责实施的食品微生物学指示菌能力验证[ACAS-PT187（2016）]。
1 材料与方法
1.1 菌株及样品
金黄色葡萄球菌[编号FSCC223004（ATCC6538）]、表皮葡萄球菌[编号FSCC 223011（CMCC（B）26069）]：广东环凯微生物科技有限公司；2瓶检验样品冻干粉末（编号分别为16-K717、16-Y374)：中国检验检疫科学研究院测试评价中心。 1.2 试剂与仪器
BP琼脂基础、脑心浸出液肉汤（BHI）、冻干血浆、卵黄亚碲酸钾增菌剂：广东环凯微生物科技有限公司；血琼脂平板：郑州安图生物工程股份有限公司；科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基：郑州人福博赛生物技术有限公司。 YXQ-LS-50SⅡ立式压力蒸汽灭菌器：上海博讯实业有限公司医疗设备厂；DHG-9070A电热恒温干燥箱、AISET YLD-6000隔水式恒温培养箱：广东环凯微生物科技有限公司；BSC-1000ⅡA2生物安全柜：苏州安泰空气技术有限公司。 1.3 方法
1.3.1 金黄色葡萄球菌的定量检测
BP平板计数法：样品达到后立即于2℃～8℃冰箱保存，试验前从冰箱中取出，
使其达到室温后开启。瓶内加入4 mL无菌生理盐水，待溶解后，吸出放入无菌瓶内，用36 mL无菌生理盐水多次清洗样品瓶，将样品完全溶解在40 mL无菌生理盐水中。以无菌吸管吸取25 mL样品于225 mL灭菌生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成体积比1∶10的样品匀液。用1 mL无菌吸管吸取体积比1∶10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL无菌生理盐水试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），换用1支1 mL无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成体积比1∶100的样品匀液。依此类推，制成原液、10-1、10-2、10-3、10-4样品液。依据GB 4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》第二法进行检验。
由于GB 4789.10-2010第二法存在涂布不均匀，耗时的情况，同时以接种量每皿为0.2 mL进行检测，每个稀释管做5个平行平板[8-9]，其它步骤与GB 4789.10-2010第二法相同。
显色培养法：将41.3 g干粉缓慢倒入500 mL无菌水中，充分搅拌溶解，并加热至100℃，直至琼脂完全溶解。将培养基水浴冷却至48℃，分别取1 mL上述浓度的样品匀液于无菌培养皿中，每个浓度做2个平行，然后倾注（15±1）mL显色培养基，混匀使其凝固、倒置，37℃培养24 h。 1.3.2 菌落计数及鉴定
BP平板上典型菌落的计数和确认按GB 4789.10-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》第二法进行。
显色培养基上对紫红色、红色、粉红色菌落进行计数。并将部分可疑菌落划线于血平板，进行染色镜检和血浆凝固酶试验。
2 结果
金黄色葡萄球菌定量检测能力验证结果与分析
