培养基制备 — 植物组织培养实验方案
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从包装粉末制备 从基础盐溶液制备 香蕉粉的制备和使用 椰子水的制备和使用
从包装粉末制备
粉末极易吸湿，必须防止空气中的水分对其潮解。单个包装的全部粉末应尽可能在打开后立即使用。不建议以浓缩形式制备培养基，否则一些盐复合物可能会沉淀。添加到培养基中的补充剂可能会影响其保质期和储存条件。制备培养基的基本步骤如下：
1. 量出组织培养级纯水（产品编号：W3500）最终所需体积的90％左右，举例来说，如果最终体积为1000 mL，则量出900 mL。选用两倍于最终体积大小的容器。 2. 在搅拌水的同时加入粉末状培养基并搅拌直至完全溶解。某些情况下可能需要加热将粉末溶解。
3. 用少量组织培养级纯水冲洗原始容器，以去除痕量的粉末。添加到步骤2的溶液中。 4. 加入所需的热稳定补剂（例如蔗糖、胶凝剂、维生素、生长素、细胞分裂素等）。 5. 添加额外的组织培养级纯水，使培养基达到最终体积。
6. 一边搅拌，一边添加NaOH、HCl或KOH，以将培养基调节至所需pH。 7. 如果加入胶凝试剂，则加热直至溶液澄清。
8. 根据需要，在高压灭菌之前（或之后）将培养基加样到培养皿中。高压灭菌后加入热不稳定的组分。
9. 在经过验证的杀菌釜中，以1 kg/cm2（15 psi）、121°C对培养基进行灭菌，持续时间为培养基灭菌实验方案所述时间长度。 10. 待培养基冷却后使用。
粉末状培养基和碱性盐混合物仅供实验室使用。不适用于医用、家用或其他用途。
未提供的材料
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去离子组织培养级水（货号W3500） 1 N盐酸(HCl)（货号H9892） 1 N氢氧化钠(NaOH)（货号S2770）
储存
将干燥培养基储存于0-5°C的干燥器中。粉末培养基变质可以通过以下方式识别：1）颜色变化；2）粉末中的颗粒化、结块或颗粒物；3）不溶性；4）pH变化；或5）正确使用时无法促进生长。
培养基中的沉淀
植物组织培养基中随着时间推移会产生沉淀。已经分析了沉淀物（未发表内部数据；Dalton等，1983），它们由微小的浅黄白色颗粒组成。沉淀物的分析表明其主要含铁、磷酸盐和锌。导致沉淀物产生的可能原因是亚铁离子不可避免地氧化成三价铁离子以及未螯合的铁离子的存在。当磷酸铁的含量超过其溶解度时，也会发生沉淀。尚未有报道表明沉淀物会对植物组织培养物的生长和发育产生有害影响。
从基础盐溶液制备
Liquid 10X溶液为您提供了方便。为了避免长期储存产生沉淀，我们配制了两种溶液，当以适当的稀释度混合时，即可制成具有适当盐浓度的溶液。制备1升培养基的基本步骤如下：小心：请勿将装在瓶子里的产品高温高压灭菌，因为瓶子不可高温高压灭菌。 1. 量出约700 mL组织培养级纯水（产品编号：W3500）。 2. 一边搅拌水，一边加入100 mL常量营养素溶液。 3. 继续搅拌混合物，同时加入100 mL微量营养素溶液。
4. 加入所需的热稳定补剂（例如蔗糖、胶凝剂、维生素、生长素、细胞分裂素等）。 5. 添加额外的组织培养级纯水，使培养基达到最终体积。
6. 一边搅拌，一边添加NaOH、HCl或KOH，以将培养基调节至所需pH。 7. 如果加入胶凝试剂，则加热直至溶液澄清。
8. 根据需要，在高压灭菌之前（或之后）将培养基加样到培养皿中。高压灭菌后加入热不稳定的组分。
9. 在经过验证的杀菌釜中，以1 kg/cm2（15 psi）、121°C对培养基进行灭菌，持续时间为培养基灭菌实验方案所述时间长度。 10. 待培养基冷却后使用。
基础盐溶液仅供实验室使用。不适用于医用、家用或其他用途。
未提供的材料
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去离子组织培养级水（货号W3500） 1 N盐酸（货号H9892） 1 N氢氧化钠（货号S2770） 所需培养基添加剂
储存
将基础盐溶液储存于0-5°C。基础盐溶液的变质可以通过以下方式辨别：1）变色；2）pH变化；3）组分沉淀；或4）正确使用的情况下不促进生长。
香蕉粉
产品编号B4032
默克提供香蕉粉，用于兰花和其他植物细胞培养。产品编号B4032是由喷雾干燥的香蕉和糊精混合物制成的粉末。大约以40 g/L的浓度使用本品。为了减少结块，一边不断搅拌，一边将粉末缓慢加入到培养基。香蕉固体的存在，在含有这两种产品的培养基中是常见现象。
椰子水
货号C5915
椰子水已被证明可刺激多种植物的茎芽增殖。椰子水由精选的椰子加工制成，去除了大部分蛋白质。然后将产品过滤灭菌并冷冻，最后发运。水中剩余的蛋白质水平可能每批有所不同，在产品冷冻时可能导致沉淀。该沉淀不应影响植物组织的生长。可以通过过滤除去沉淀物，亦可让沉淀物沉在瓶子底部，然后把上清液倒出来，以此除去沉淀物。根据您的标准培养基批次的大小，可以将椰子水分为较小的等分试样冷冻保存。椰子水应以5-20％（v/v）的浓度使用。 材料
货号
产品描述
B4032香蕉粉suitable for plant cell culture
C5915椰子汁suitable for plant cell culture
H9892盐酸 溶液1.0 N, BioReagent, suitable for cell culture S2770氢氧化钠 溶液1.0 N, BioReagent, suitable for cell culture
W3500水sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture
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