腺病毒载体构建小鼠趋化素基因缺陷性细胞系

腺病毒载体构建小鼠趋化素基因缺陷性细胞系

陈婷婷;曹园芝;熊玮;董少红;

【期刊名称】《中国组织工程研究》 【年(卷),期】2024(22()24)

【摘要】背景：趋化素在动脉粥样硬化中的表达水平上调,趋化素可能参与了动脉粥样硬化的病理过程。目的：应用腺病毒介导的RNA干扰技术,构建并有效沉默趋化素基因的表达体,为研究其对动脉粥样硬化机制奠定实验技术基础。方法：以小鼠趋化素基因mRNA序列作为干扰靶点,以腺病毒基因pCD316-ZsGreen-shRNA作为质粒载体,设计4组靶向趋化素基因的shRNA序列,构建靶向鼠趋化素的shRNA表达质粒,另构建不针对任何已知mRNA的阴性对照shRNA表达质粒,筛选出干扰效果最好的shRNA,并在293T细胞对腺病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10,转染腺病毒形成趋化素基因缺陷性B16F10细胞,用qPCR和Western blot检测感染腺病毒后细胞中趋化素mRNA和蛋白水平。结果与结论：（1）PCR以及基因测序结果表明Chemerin shRNA腺病毒载体构建成功,腺病毒的滴度为2×10^10 PFU/mL,pCD-shRNA4对趋化素基因的抑制效果最显著（P〈0.001）;（3）qPCR和Western检测B16F10细胞中趋化素mRNA水平和蛋白水平,结果显示Chemerin-shRNA4达到一定的敲低效果;（2）表明腺病毒介导的shRNA-Chemerin4可有效沉默B16F10中趋化素基因的表达。 【总页数】5页(P.3875-3879)

【关键词】趋化素;腺病毒;RNA干扰;动脉粥样硬化;质粒;基因转染;免疫印迹;组织工程;血管平滑肌细胞