六 油料作物病害
油料作物主要包括油菜，芝麻、大豆、花生和向日葵等。其中油菜、芝麻在长江流域和黄淮流域各省广泛种植，大豆、花生、向日葵在北方在栽培较普遍。油菜菌核病、病毒病和霜霉病是油菜的重要病害；大豆胞囊线虫、疫霉根腐病、病毒病和霜霉病在大豆上危害较严重；芝麻茎点枯病、枯萎病和疫病是芝麻上的严重病害；茎腐病、叶斑病、网斑病、青枯病和根结线虫病在花生上危害较大；菌核病、锈病、霜霉病和列当等是向日葵上分布较广，危害较大的病害。
实验实习一 油料作物病害的识别与鉴定
一 目的要求 了解油料作物常见病害种类，掌握主要病害发生危害的症状特点和病原物显微形态特征，熟悉一般病害的症状和发生概况。从而为大田病害的正确诊断，田间调查和病害防治奠定基础。
二 实验用品 显微镜，载玻片，盖玻片，解剖刀，镊子，挑针，刀片，纱布，蒸馏水滴瓶，幻灯机，投影仪及相关电化教学设备等。
三 实验材料 油菜主要病害（油菜菌核病、霜霉病、白锈病和病毒病等）；花生主要病害（花生黑斑病、褐斑病、网斑病、青枯病、锈病和根结线虫病等）；大豆主要病害（大豆胞囊线虫病、疫霉根腐病、花叶病、霜霉病、菟丝子等）；芝麻主要病害（芝麻茎点枯病、枯萎病、叶斑病、疫病等）以及向日葵主要病害（菌核病、锈病、霜霉病和列当等）的盒装标本、新鲜材料、挂图、病原物玻片以及电化教学等相关影像资料。 四 观察内容和方法
(一)油菜菌核病（Sclerotinia sclerotiorum）
1 症状 本病可危害油菜植株地上部的各个部位，其中以茎秆发病最重，损失最大。叶片病斑呈圆形或不规则形，病斑周缘有一层黄色晕圈；茎部病斑初为水渍状，逐渐扩展为长形或环茎大斑块，后期病部变白。病部提早枯死，病茎内有鼠粪状菌核。注意观察叶片病斑内外层色泽，病斑是否破裂？有无腐败现象？有无白色霉层？危害茎干最重的是上部还是下部？湿度大时是否腐败和长出白色霉层？菌核发育形成不同时期颜色变化如何？
2 病原 属子囊菌亚门核盘属真菌。病菌菌核黑色，鼠粪状或球形、不规则形，成熟菌核外皮黑色，髓部粉色至米黄色，为疏丝组织组成。菌核萌发可产生1至数个柄，柄褐色，顶部膨大形成子囊盘。子囊盘黄褐色，子实层由子囊与侧丝栅状排列组成。子囊长圆形，顶部钝圆，内生8个子囊孢子，子囊孢子无色透明，椭圆形。先用肉眼观察菌核的形状、大小、然后用刀片切开菌核观察内外颜色是否一致？根据提供的实验材料，观察菌核萌发子囊盘的形状、大小、颜色，再经徒手切片纵切子囊盘，制片镜检，或直接观察子囊盘的永久玻片 注意观察显微镜下子囊和侧丝的排列情况，子囊排列是否整齐？每个子囊内有几个子囊孢子？子囊和子囊孢子呈何形状？子囊孢子有无颜色和隔膜？ （二）油菜霜霉病(Peronospora parastica) 1 症状 本病可危害油菜地上部的各部位，重病植株可导致死亡。叶片病斑正面为不规则形或多角形黄色斑块，背面有霜状霉层；花轴受害呈肿大弯曲的“龙头状”， 花瓣变绿呈小叶状。注意观察叶片病斑扩展是否受叶脉限制？重病植株是否较健株矮小？整株是否有霜状物？病有无干枯现象？ 2 病原 属鞭毛菌亚门霜霉菌属真菌。病组织产生白色霜状霉层为病菌的孢囊梗和孢子囊。
孢囊梗无色，向顶端分支，每小梗顶端着生一个孢子囊，孢子囊单孢无色，长椭圆形。发病后期在病组织内产生卵孢子。一般在“龙头”皮层内最多。卵孢子球形，厚壁。用解剖刀或挑针从病叶背面挑取少许霜状霉制片镜检，观察孢囊梗及孢子囊形态特征。用解剖刀在病花轴山的“龙头”上刮取少量病组织制片镜检，观察卵孢子的形态特征。注意观察显微镜下孢囊梗是否有隔膜？基部和顶端粗细是否一致？分枝方式如何？孢子囊有无颜色和乳实？卵孢子形状怎样？是什么颜色？厚壁还是薄壁？外表是否光滑？ (三)油菜白锈病（Albugo condita） 1 症状 主要危害叶片和花轴。叶片上产生白色隆起小包斑，后期破裂散出白色粉末（病菌的孢子囊）。花轴受害后，也形成肿胀状“龙头”，与霜霉病症状相似，二者主 要区别于霜霉病的“龙头”表面光滑，并产生白色霜状霉层，而白锈病的“龙头”表面粗糙，有白色隆起胞斑。两病的“龙头”在组织内均产生卵孢子。 2 病原 属鞭毛菌亚门白锈菌属真菌。胞囊梗呈棍棒状，无色，顶端串生孢子囊，孢子囊近球形，无色，单胞。卵孢子球形，黄褐色，外壁很厚，表面有不规则的突起。用挑针挑取白色病斑内的粉末制片镜检，或直接镜检病菌永久玻片观察孢囊梗和孢子囊的形态特征。用解剖刀括取“龙头”少量肥厚病组织制片镜检，观察卵孢子形态特征。
注意观察显微镜下病菌孢子囊梗和孢子囊的颜色，形态；卵孢子的形态，颜色，壁的厚薄，以及外壁特征，并与霜霉病菌比较区别。
（四）油菜病毒病（TuMv ，CMV，TMV） 1 症状 油菜病毒病的症状在甘蓝型油菜和白菜型油菜上表现出明显区别。甘蓝型油菜上产生系统性黄斑和枯斑型症状，而白菜型油菜表现为花叶症状。黄斑型症状特点是初期病叶上出现分散绿色斑点，后逐渐变成明显的黄斑，病斑背面中心出现褐色细小枯点，后期病斑正面也出现枯点。枯斑型症状病叶上出现深褐色枯斑,叶柄，花梗，茎杆等部位可产生黑褐色油渍状坏死长条纹。花叶型症状主要表现为病叶呈黄绿相间花叶，皱缩，病株矮缩结荚少或不接荚，提早枯死。观察病株标本，注意比较观察黄斑型和枯斑型在叶片和茎秆上的区别要点，比较病株和健株株型差异，病株花梗是否短而弯曲？花的颜色是否加深？荚果是否僵弯？种子是否正常？
２ 病原 油菜病毒病主要有芜菁花叶病毒 （ＴuＭＶ），黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）和烟草花叶病毒（ＴＭＶ）所致，不同油菜产区病毒主次不尽相同，通常以芜菁花叶病毒为主。ＴuMＶ粒体为线状，ＣＭＶ粒体为球状，ＴＭＶ粒体为棒状。根据试验提供的病毒电镜图片，或有关多媒体教学课件影像资料，观察三种病毒粒体形态。 （五）油菜萎缩不实病（生理性病害）
１ 症状 病株最明显的症状是花而不实。根系发育不良，侧根很少，根表皮变褐，根颈膨大，有的内部变空，皮层龟裂，中部叶片由叶缘向内出现玫瑰红色，叶质增厚、易脆、倒卷。花序顶端花蕾褪绿变黄，萎缩枯干或脱落。有的抽苔迟缓，主花序和分枝花序极度紧缩矮化，形如试管刷。胚珠萎缩不能发育成正常种子，往往形成空角，即花而不实。有的形成只有几粒不规则种子的粗大“萝卜角果”。观察病株标本，注意子粒形成情况，与健株有何区别？ ２ 病原 生理性病害，主要由由缺硼引起。 （六）花生黑斑病（Cercospora personata）
１ 症状 本病主要危害花生的叶片、叶柄、托叶，茎杆也可受害。病斑圆形或近圆形，黑褐色，病斑周缘有一层较窄的黄色晕圈，被面有许多黑色小点（子座）呈同心轮纹状排列，潮湿时病斑上产生一层灰褐色霉状物。
２ 病原 属半知菌亚门尾孢属真菌。分生孢子梗丛生，粗短，上部膝状弯曲。分生孢子到棍棒状或圆筒形 ３~５个隔膜。用解剖刀括取病斑上的霉层制片镜检，或直接镜检病菌永久玻片。观察病菌分生孢子梗和分生孢子形态特征。
（七）花生褐斑病（Cercospora arachidicola）
１ 症状 本病对花生的危害部位与黑斑病基本相同。两病的症状特点也有相似之处，二者的区别要点在于褐斑病在叶片上的病斑较黑斑病的大， 圆形或不规则形圆形，颜色较浅，呈黄褐色，病斑边缘黄色晕圈较黑斑病宽，潮湿时，病斑上也产生灰褐色霉层，但不产生轮状排列的小黑点。注意比较观察褐斑病和黑斑病症状异同点，对照区别病斑大小、颜色深浅、病斑周缘黄色晕圈带的宽窄，仔细观察黑斑病病斑的背面小黑点的排列状况。
２ 病原 属半知菌亚门尾孢属真菌．分生孢子梗丛生或散生，直或略弯，上部渐细呈曲膝状有明显孢痕，分生孢子顶点，倒棍状或鞭状，５~７个隔膜。用解剖刀刮取病斑上的霉层制片镜检，或直接镜检永久玻片，观察病菌分生孢子梗和分生孢子形态特征。注意比较观察褐斑病菌和黑斑病菌显微形态主要差别，仔细观察两种病菌分生孢子梗和分生孢子有无隔膜，隔膜数多少，颜色的深浅，哪种病菌有明显子座？子座是什么形态？ （八）花生锈病（Puccinia arachidis）
1.症状 本病主要危害花生的叶片，严重时其它部位也可受害。叶片初生褪绿色斑点，逐渐变黄并隆起，最后变成褐色，表皮裂开，成为锈状粉斑（夏孢子堆）并散出锈状粉末（夏孢子），严重时病株枯死。
注意观察受害叶片出现的夏孢子堆是正面居多还是背面居多？出现夏孢子堆的相对应叶面颜色是否变黄？田间植株发病是从下部往上蔓延还是从上部向下扩展？
２.病原 属担子菌亚门双孢锈菌属真菌。夏孢子椭圆形或近圆形，黄褐色，表面有细刺，中央有两个排列对称的发芽孔。用挑针挑取叶片上的夏孢子堆制片镜检，观察夏孢子的形态特征。注意观察夏孢子表面的细刺和发芽孔。 （九）花生茎腐病（Diplodia gossypina） 1.症状 本病可危害植株的地上和地下部分，花生幼芽出土前感病导致腐烂。子叶感病呈黑褐色干腐状，并可沿子叶柄侵染根颈部，形成黄褐色不规则病斑，渐显黑褐色腐烂，上部萎焉枯死。潮湿时，病部产生许多黑色小颗粒（分生孢子器）。
２.病原 属半知菌亚门色二孢属真菌。分生孢子器突出寄主体外，黑色，有孔口。分生孢子梗短条状，无色，分生孢子初期无色，单胞，椭圆形，成熟时为暗褐色，双胞。 用挑针挑取病组织上的分生孢子器制片，镜检分生孢子器和分生孢子形态特征，注意观察病菌分生孢子器顶端乳突状突起孔口，分生孢子不同发育时期隔膜和颜色变化情况。 （十） 花生青枯病 （Ralstonia solanacearum）
1.症状 本病从花生苗期至收获整个生育期均可发病，以盛花，落叶期发病最盛。其主要症状特点是叶片急速凋谢，维管束变色，病株之根尖端变褐湿腐，根瘤呈墨绿色。潮湿条件下，用手挤压茎部切口处，常有混浊白色的细菌液渗出。观察病害新鲜标本，注意凋萎的病株叶片颜色是否为青绿色？剖视病株茎秆和根茎部维管束是否变褐？手挤是否有混浊白色的细菌液渗出？根瘤的颜色是否呈墨绿色？
２.病原 属薄壁菌门青枯劳尔氏菌属细菌。菌体短杆状，两端钝圆，有一根至多根极生鞭毛。在培养茎上，菌落乳白色，光滑稍隆起。根据提供的实验材料，观察细菌在培养菌上的菌落特征，涂片观察或直接观察病菌封片，注意病菌菌体形态和革兰氏染色反应。 （十一）花生根结线虫病（Meloidogyne arenaria ；M. hapla）
1.症状 本病可危害花生植株的地上和地下部分。病株的地上部生长缓慢，叶黄且脱落，花少，而开放迟。病株地下根间形成不规则虫瘿。虫瘿上可形成乱丝状“须根团”，成熟的果壳上形成较大的 痂状虫瘿。注意观察病株根间的虫瘿的特征，虫瘿表面是否粗糙？剖视内部是否有乳白色砂粒状的雌虫？并比较虫瘿与根瘤的区别？ ２ 病原 属线形动物门根结线虫属线虫。国内的报道病原线虫有花生根结线虫和北方根结线虫两个种。白色一龄线虫常呈“８”字形卷曲在卵壳内，二龄幼虫头部较钝，尾尖翘，吻针
呈 “大头针状”。雌成虫早期呈长颈烧瓶状，成熟时呈鸭梨形。用挑针挑取根瘤被白色砂粒状制片镜检，观察雌虫形态特征。或直接检验永久玻片。观察幼虫或雌虫形态。注意观察两种根结线虫形态上的区别要点。那种线虫阴门近尾尖处有点刺？那种线虫近侧线处有不规则的横纹？
（十二）芝麻茎点枯病(Macrophomina phaseolina) １ 症状 该病自苗期到成株期均可危害，以开花结果后期发生较重。病株根部变褐腐烂茎部产生黑褐色长条斑，中间呈银灰色，有光泽，密生小黑点，皮层下及髓部产生大量的小菌核。病株常枯死，茎杆易折断。注意观察病斑发生部位、色泽、形状，病部是否产生大量小黑点？皮层下是否有黑褐色小菌核？
2病原 属半知菌亚门壳球孢属真菌。病部的小黑点是病菌的分生孢子器，着生在寄主表皮的角质层下，球形或近球形，黑褐色，以孔口突破表皮而外露。分生孢子长椭圆形或圆筒形，无色，单胞。菌核小，球形或不规则形，黑褐色。观察病菌玻片，注意病原菌分生孢子器及分生孢子特点。
（十三）芝麻枯萎病（Fusarium oxysporum. f.sp. sesami）
1 症状 多在成株期发病，病株叶片自下而上逐渐变黄萎蔫，最后整株枯死，有时仅半边枯死。病株根部、茎基部变褐腐烂，在茎秆上产生长条形褐色病斑。潮湿时，在枯死病部产生粉红色粘质霉层。剖茎检查，可见维管束变为红褐色至褐色。仔细观察病株发病部位，是否为系统侵染？病斑特点如何，有无霉层产生，有何特征？维管束是否变色？
2 病原 属半知菌亚门镰孢属真菌。病部的粉红色霉层主要是病菌的分生孢子，大型分生孢子镰刀形，稍弯，无色透明，顶端细胞圆锥形，足胞明显，一般2～5个分隔，多数有3个分隔。小型分生孢子椭圆形或卵圆形，无色透明，多数单细胞。厚垣孢子球形或近球形，淡褐色，顶生或间生。观察大、小分生孢子形状、颜色、分隔情况，有无厚垣孢子及其特点。 （十四）芝麻褐斑病(Cercospora sesami)
1．症状 主要危害芝麻叶片，病斑近圆形或多角形，中央灰白色，边缘暗褐色，病斑背部有灰色霉层，严重时叶片枯死脱落。观察病斑形状及色泽，背部有无霉层及其特点。
2．病原 属半知菌亚门尾孢属真菌。分生孢子梗丛生，暗褐色，直立不分枝。分生孢子尾鞭状，无色，直或稍弯，有多个隔膜。镜检病菌玻片，观察分生孢子梗和分生孢子的形状、颜色、分隔情况等特征。
（十五）芝麻叶枯病(Corynespora sesamum)
1．症状 主要危害中后期芝麻叶片，病斑近圆形或多角形，黑褐色，潮湿时病斑上生有灰黑色霉层，严重时叶片干枯脱落。观察病斑形状及色泽，有无霉层及其特点。
2．病原 属半知菌亚门棒孢属真菌。分生孢子梗丛生，暗褐色，直立。分生孢子棍棒状，一端较粗而另一端较细，暗褐色，稍弯曲，有多个隔膜。镜检病菌玻片，重点观察分生孢子的形状、颜色、分隔情况等特征。
（十六）芝麻疫病(Phytophthora nicotinane var. sesami ) 1．症状 为害芝麻茎、叶和蒴果。叶上病斑初呈水渍状褐色较大病斑，后呈黑褐色湿腐状，略有轮纹，边缘常生白色霉层。茎基部感病后多形成绕茎病斑，水浸状黑褐色，多有白色霉层，病部常缢缩并上下蔓延，严重时致使整株枯死。茎上部发病可蔓延至蒴果，并可造成顶枯。注意观察发病部位和病斑特点，病部是否产生霉层？特点如何？
2．病原 属鞭毛菌亚门疫霉属真菌。孢囊梗多从叶背部生出，无色。孢子囊近无色，近圆形，顶端有乳突。用挑针自保湿培养的病叶上挑取少量霉层制片镜检。注意观察孢子囊的形状、大小、有无乳状突起等特点。
（十七）芝麻角斑病(Pseudomonas syiringae pv. sesami)
1．症状 主要为害芝麻叶片，严重时亦可危害叶柄、茎杆和蒴果。叶上病斑黑褐色,多角
形，周围常有黄色晕圈，干燥时病斑常穿孔，后期病叶干枯脱落。有时叶脉、叶柄和茎杆上可形成黑褐色长条状病斑。注意观察发病部位和病斑特点。比较与褐斑病和叶枯病的区别。 2．病原 属假单胞杆菌属细菌。菌体杆状，G-，极生2-5根鞭毛。用油镜观察病菌玻片，注意病菌形状，革兰氏染色反应，鞭毛有无及其着生部位。 （十八）芝麻花叶病(Sesame Mosaic Virus ，SMV)
1．症状 芝麻整株系统感病，病株矮化，茎顶扭曲，叶片呈花叶状，小而畸形。病株结蒴少或不结蒴，种子秕瘦。观察病株标本或有关教学材料，注意病株与健株有何差异？ ２.病原 属病毒。
（十九）大豆疫霉根腐病（Phytophthora sojae）
1．症状 子叶节期发病，茎基部腐烂，根变褐，软化，直达子叶节，植株萎缩或立枯。真叶期发病，茎上出现水渍状病斑，叶黄化、萎蔫，侧根几乎全部腐烂，主根变为深褐色，这种深褐色环绕主茎向上延伸，有时可达第十节。成株期发病，叶片褪绿，植株萎蔫，病茎的皮层及维管束组织均变褐。注意观察：①不同时期病株的症状特点。②后期病株的皮层及维管束是否变色。③不同时期病株根部呈何状态？
2．病原 属鞭毛菌亚门疫霉属真菌。卵孢子球形，壁厚而光滑。孢囊梗分化不明显，孢子囊无色、卵形、单孢无乳突。用挑针在病组织材料上挑取少量黄色粉末状物，制片镜检。注意观察卵孢子的形态特征，卵孢子和藏卵器器壁结合的紧密程度；观察孢囊梗及孢子囊的形态有何特征？
（二十）大豆胞囊线虫病（Hetercdera glycines）
1．症状 受害的大豆植株明显矮化，叶片褪绿黄化、瘦弱，花丛生，结荚少而小，严重时整株枯死。地下部根系发育不良，根表附有大量初为白色后变为黄褐色的小颗粒，此即为线虫的胞囊（雌成虫）。注意观察病株地上部症状特点，根系及根瘤发育如何？病根上是否有胞囊？ 2．病原 属异皮科胞囊线虫属。雄虫线状，雌虫柠檬状，体壁膜质至革质，无色至褐色，腹部膨大成胞囊。胞囊阴门椎双半窗形，下桥和胞状突均发达。卵蚕茧形或长圆形，一侧微弯，每胞囊内平均出贮卵200多粒。在放大镜下观察根上胞囊的形 态及色泽，在显微镜下观察线虫的卵、雌雄虫、胞囊的形态特征，并区分不同龄期的幼虫。 （二十一）大豆霜霉病（Peronospora manshurica）
1．症状 主要危害叶片，开始为灰白色至淡黄色小斑点，后扩大成圆形或受叶脉的限制呈大小不一的不规则形病斑，灰褐色至暗褐色，边缘黄绿色。潮湿时叶片背面病斑长出灰色至紫灰色霉层，即病菌的孢囊梗和孢子囊。注意观察：①病斑发生的部位、色泽、形状；②叶片正反面的症状特点；③病征有何特点？
2. 病原 属鞭毛菌亚门霜霉属真菌。孢囊梗自气孔伸出，为二叉状分枝3～4次，无色透明，单根或成簇，顶端分枝尖锐，向内弯曲呈钳状，无色，着生单个椭圆形或倒卵圆形孢子囊，有乳头状突起，无色，单孢。卵孢子近球形，黄褐色或淡褐色，壁厚，表面光滑或有乳头状突起。在病组织材料上刮取少量霉状物，制片镜检，观察孢囊梗的色泽、形状、分枝方式及其分枝顶端特点；孢子囊的形状、色泽、顶端是否有乳状突起？ （二十二）大豆炭疽病（Colletotrichum destructivum）
1．症状 自苗期到成熟期均可发病，主要危害茎和荚，亦可危害叶片和叶柄。病斑褐色，其上密生排列不规则形的黑色小点，即病菌的分生孢子盘，在病荚上呈轮纹状排列。苗期子叶发病，病斑黑褐色，边缘色淡，病斑扩大后常出现凹陷或开裂，病斑也可以从子叶扩展到幼茎，茎、叶柄上病斑不规则，褐色。叶片上病斑边缘呈深褐色，内部浅褐色。注意观察病斑发生的部位、色泽、是否具小黑点？小黑点是否呈轮纹状排列？病苗、病荚症状有何特点？
2．病原 有性世代属子囊菌亚门小丛壳属真菌。子囊壳球形，常多个聚生在皮层的子座组织内，子囊长圆形至棍棒形，有侧丝。子囊孢子无色，单孢，微弯曲。无性世代属半知菌亚门
油料作物病害实习指导
