汉坦病毒S基因毕赤酵母表达系统的构建

汉坦病毒S基因毕赤酵母表达系统的构建

魏骏飞;徐昭;李力;王志锐;杨东靖;陈锦英

【期刊名称】《中国人兽共患病学报》 【年(卷),期】2006(022)001

【摘要】目的构建汉坦病毒HTN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统.方法应用RT-PCR法扩增汉坦病毒Z10株和L99株编码核蛋白的S基因,将扩增产物分别与pGEM-T-Easy载体连接,经序列分析后双酶切,分别定向克隆入载体pPICZαΑ和pPICZαC,继而将重组质粒以SacⅠ线性化并电转化入毕赤酵母X33感受态细胞,用Zeocin筛选高拷贝转化子进行鉴定.结果 PCR扩增产物约为1290bp,与T载体相连测序结果与Genbank相应序列比较,核苷酸序列同源性分别为99.84%和99.92%,其编码蛋白质二级结构均无改变.定向克隆获得pPICZαΑ-Z10S和pPICZα-L99S,分别电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株PpX33-Z10S和PpX33-L99S,提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符.结论成功构建汉坦病毒HIN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统,为进一步研究奠定基础.

【总页数】4页(11-14)

【关键词】汉坦病毒;S基因;毕赤酵母

【作者】魏骏飞;徐昭;李力;王志锐;杨东靖;陈锦英

【作者单位】天津医科大学微生物学教研室,天津,300070;天津医科大学微生物学教研室,天津,300070;天津市卫生防病中心;天津市卫生防病中心;天津市卫生防病中心;天津医科大学微生物学教研室,天津,300070 【正文语种】中文