【借题发挥】理清教材，突破高考的瓶颈一一长句描述类题型 问题1:消毒与灭菌有何不同？
答案：消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物 （不包 括芽孢和孢子）。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢 子。
问题2:平板划线法和稀释涂布平板法如何选用？
答案：微生物的接种方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，根据接种的目的不 同选用不同的接种方法。
① 平板划线法可对混合菌进行分离，这种方法可以观察菌落特征，但不能用于计数。 ② 稀释涂布平板法可对混合菌进行分离，该方法可以计数、可以观察菌落特征，由于长 成的一个单菌落也可能来自样品中的 2?3或更多个细胞，所以该方法计数的结果往往比实际 值偏低。
问题3:选用葡萄发酵制葡萄酒时，应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？
答案：应先冲洗，再除去枝梗，目的是避免除去枝梗时引起葡萄破损，从而增加杂菌污 染的机会。 问题4:含有抗生素的牛奶能发酵成酸奶吗？
答案：不能。因为酸奶发酵所需菌种为乳酸菌，抗生素会杀死或抑制乳酸菌的生长。 。类型2整体对比历年同类题，找共性和趋势
6. [2016 ?全国卷H, 39]苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的，回答下列问题：
（1） 酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在酵母 菌细胞的 _________ 中进行，其产物乙醇与 ____________ 试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于 乙醇的检验；过程③在酵母菌细胞的 _____________ 中进行。与无氧条件相比，在有氧条件下， 酵母菌的增殖速度 __________ 。
（2） 第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸 杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在 _____________ 条件下才能完成。
（3） 在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同， 第一阶段的温度 ___________ （填 “低于”或“高于”）第二阶段的。
（4） ________________ 醋酸杆菌属于 ________________ 核生物，其细胞结构中 （填“含有”或“不含有”）线粒 体。
解析：（1）图示中的过程①和②分别表示无氧呼吸的第一、第二阶段，其场所均为细胞质 基质；橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇 （酒精）发生化学反应，变成灰绿色。过程 ③ 表示有氧呼吸的第二、三阶段，其场所分别为线粒体基质和线粒体内膜，即在酵母菌细胞 的线粒体中进行。与无氧条件相比，有氧条件下酵母菌的增殖速度快。 （2）醋酸杆菌是一种好 氧菌，在氧气充足的条件下才能进行旺盛的生命活动，因此将第一阶段产生的乙醇转变为醋 酸的过程，需要在有氧条件下才能完成。（3）第一阶段即果酒的制作，所控制的温度范围是 18? 25 C,第二阶段即果醋的制作所控制的温度范围是 30?35 C,所以第一阶段的温度低于第 二阶段的。（4）醋酸杆菌属于原核生物，其细胞结构中不含线粒体等复杂的细胞器。
答案：（1）细胞质基质 重铬酸钾 线粒体 快（2）有氧 （3）低于 （4）原 不含有
7. [2016 ?全国卷川，39]某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯
化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。 回答下列问题：
（1） _______________________________________ 分离纯化乳酸菌时，首先需要用 对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度
稀释的理由是 ______________________ 。
（2） _____________________________________________________________________ 推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有 ____________________________________________ 和 _________________ 。分离纯化时应挑选出 _______________ 的菌落作为候选菌。
（3） 孚L酸菌在—20 C长期保存时，菌液中常需要加入一定量的 ___________________ （填 “蒸馏水”、“甘油”或“碳酸钙”）。
解析：（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释；进行梯度稀 释的理由是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌将被分散成单个细胞，通过培养， 从而能在培养基表面形成单个的菌落。若直接培养，由于泡菜滤液中菌的浓度高，则很难分 离得到单菌落。（2）由题意可知，分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌 产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。由此可推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的 作用有中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸和鉴别能产生乳酸的乳酸菌；根据产酸菌在含 CaCO 的培养基上产生透明圈的原理，分离纯化时应挑选出具有透明圈的菌落作为候选菌，然后用 平板划线法进一步分离纯化。 （3）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。即将 1 mL培养的菌种转移到已灭菌的盛有 1 mL甘油的甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在一 20 C 的冷冻箱中保存。所以乳酸菌在—20 C长期保存时，菌液中需要加入一定量的甘油。
答案：（1）无菌水 泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落 （2）鉴别乳 酸菌 中和产生的乳酸（或酸）具有透明圈 （3）甘油
8. ［全国卷I ］已知微生物 A可以产生油脂，微生物 B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可 用于生物柴油的生产。回答有关问题：
（1） _____________________________________________ 显微观察时，微生物 A菌体中的油脂通常可用 _________________________________________________ 染色。微生物 A产生的油脂不 易挥发，可选用 ________ （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。
（2） 为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物 B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂 物的土壤中取样，并应选用以 _________ 为碳源的固体培养基进行培养。
（3） 若要测定培养液中微生物 _______________ B的菌体数，可在显微镜下用 直接计数；若要测定
其活菌数量，可选用 ________ 法进行计数。
（4） 为了确定微生物 B产生的脂肪酶的最适温度， 某同学测得相同时间内，在35 C、40 C、 45 C温度下降解10 g油脂所需酶量依次为 4 mg 1 mg 6 mg则上述三个温度中， ______________ °C 条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕 ___________ C设计后续实验。
解析：（1）脂肪可被苏丹川（IV ）染液染成橘黄色（红色）；题干中说明微生物 A产生的油脂 不易挥发，则可以采用萃取法提取微生物 A中的脂肪。（2）油脂为有机化合物，富含 C元素， 故为了从自然界获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来配制培养基。在该培养 基上，能分解油脂的微生物可以正常生长，其他微生物不能正常生长，从而实现分离。 （3）可
利用血球计数板计数法测定菌液中的微生物数量，但计数时活菌和死亡的细菌都会被计数， 所以测定培养液中的活菌数应采用稀释涂布平板法。 （4）在45 C时，降解10 g油脂所需的酶 量最大，则该温度下酶活性最低；由题干可知， 40 C时分解 10 g油脂所需的酶量最少，应 在40 C左右范围内设置不同温度梯度来继续探究该酶的最适温度。
答案：（1）苏丹川（或苏丹V） 萃取法 （2）油脂 （3）血细胞计数板 稀释涂布平板 （4）45 40
9. ［全国卷I ］植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题： （1） 分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3种组分组成的复合酶，其中 的葡萄糖苷酶可将 _________ 分解成 _________ 。
（2） 在含纤维素的培养基中加入刚果红 ______ （CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用
含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 ______________ 。
（3） 为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种 培养基 （成分见下表）：
据表判断，培养基甲 _________ （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，
原因是 ____________________________ ;培养基乙 _________ （填“能”或“不能”）用于分离和 鉴 别 纤 维 素 分 解 菌， 原 因 是 解析：(1)纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多糖类 物质。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，如下图：
纤维素酶 葡萄糖苷酶
纤维素I ---------- > I纤维二糖I --------------- >1 葡萄糖 (2) 刚果红与纤维素形成红色复合物， 当纤维素被纤维素酶分解后， 红色复合物无法形成， 出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 (3) 分离和鉴别纤维素分解菌的培养基为固体培养基，且需以纤维素为唯一碳源。
答案：(1)纤维二糖 葡萄糖 (2)红 透明圈 (3) 不能液体培养基不能用于分离单菌落 不能培养基中没有纤维素，不会形成 CR -纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
O类型3它山之石一一亦可攻玉 10. [2019 ?海南卷]回答下列问题。
(1) 玫瑰精油可用玫瑰花瓣为原料，采用水蒸气蒸馏法提取。水蒸气蒸馏法的原理是
在进行蒸馏时，冷凝管的进水口比出水口 ____________ (填“高”或“低”)。蒸馏收集到的 乳浊液是玫瑰精油和水的混合物，要得到玫瑰精油，需要向乳浊液中加入
NaCI，其目的是
______________________________________________________________________________ ; 得到的油层还需要加入无水 Na2SQ , 其目的是
(2)
作果酒时，发现在制作原料中添加一定量的糖， 某同学在通过发酵制可以提高酒精度,
原因是 _______________________________________________________________________________
在家庭以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌，原因是
______________________________________________________________________________ ;
在制作葡萄酒的过程中，如果密封不严混入空气，发酵液会变酸，可能的原因是
解析：(1)水蒸气蒸馏法是利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来，形成油水混 合物，冷却后，混合物又会重新分离出油层和水层。在进行蒸馏时，为了避免防止冷凝管炸 裂，进水口比出水口低。蒸馏收集到的乳浊液是玫瑰精油和水的混合物，要得到玫瑰精油， 需要向乳浊液中加入 NaCI可以促进油和水的分离；得到的油层还需要加入无水 NatSQ,可以 吸去芳香油中残留的水分。(2)糖类是主要的能源物质，可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源 物质，还可以作为酒精发酵的原料。故在通过发酵制作果酒时，在制作原料中添加一定量的 糖，可以提高酒精度。在家庭以葡萄为原料制作葡萄酒时，由于葡萄皮上附着有野生的酵母 菌，故可以不添加酵母菌；在制作葡萄酒的过程中，如果密封不严混入空气，会造成醋酸菌 大量增殖，进行醋酸发酵，发酵液会变酸。
答案：(1)利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后， 混合物又会重新分离出油层和水层 低促进油和水的分离 吸去芳香油中残留的水分 (2) 糖类是主要的能源物质，可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源物质，还可以作为酒精发酵的 原料葡萄皮上附着有野生的酵母菌 醋酸菌大量增殖，进行醋酸发酵
11. [2019 ?浙江4月选考]回答与果胶和果胶酶有关的问题：
(1) 通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还有 (2) 为了获得高产果胶酶微生物的单菌落，通常对分离或诱变后的微生物悬液进行
(3) ________ 在某种果汁生产中，用果胶酶处理显著增加了产量，其主要原因是果胶酶水解果胶使 _________________ 。果汁生产中的残渣果皮等用于果胶生产，通常将其提取液浓缩后再加入 使之形成絮状物，然后通过离心、真空干燥等步骤获得果胶制品。
(4) _________________________________________________________________ 常用固定化果胶酶处理含果胶的污水，其主要优点有 ___________________________________________ 和可连续 处理等。在建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温 度、pH作用时间等因素外，还需考虑的主要有 ________________________________ 和 ________________ 。
解析：本题考查果胶和果胶酶，意在考查考生的理解能力和应用能力。 (1)通常从腐烂的 水果上分离产果胶酶的微生物，其原因除水果中果胶含量较高外，还有腐烂的水果中含产果 胶酶的微生物较多。(2)对微生物悬液进行涂布分离(或划线分离)，培养后可获得单菌落。(3) 果胶能将植物细胞粘合在一起，果胶酶水解果胶可以使水果组织软化疏松及细胞受损。果胶 不溶于乙醇，所以将其提取液浓缩后再加入 95%乙醇使之形成絮状物，然后通过离心、真空干 燥等步骤获得果胶制品。(4)固定化酶工艺具有可提高酶的稳定性以及可连续处理等优点。在 建立和优化固定化果胶酶处理工艺时，除考虑果胶酶的活性和用量、酶反应的温度、 pH、作 用时间等因素外，还需考虑的主要有固定化的方法和固定化所用的介质。
答案：(1)腐烂的水果中含产果胶酶的微生物较多 (2) 涂布分离(或划线分离)(3)水果组织软化疏松及细胞受损 95%乙醇 (4)提高果胶 酶的稳定性 固定化的方法 固定化所用的介质
12. [2018 ?江苏卷，31]酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来 源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。 研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下 列问题:
(1) ______ 配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的 __________ ，及时对培养基进行分装，并进行 _________________ 灭菌。
(2) 取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约 _______ (在25 C、50 C或80 C中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
(3) 挑取分离平板 中长出的单菌 落，按步骤 ④所示进行 划线。下列叙述合理的
a .为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b ?划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c ?挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量 d ?可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，可获得甲醇高耐受株 (4) 步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和 _______ 供应。 为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释 1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用 25X 16 型血细胞计数板计数 5个中格中的细胞数，理论上 ___________ 色细胞的个数应不少于 __________ , 才能达到每毫升3X 109个活细胞的预期密度。
解析：(1)配制培养基的操作步骤为称量T溶化T定容T调 pHH培养基的分装T包扎T火 菌，因此微生物的培养基配制好后应该先调节 pH,再分装。常见的灭菌方法有：干热灭菌、 高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。 (2)在步骤③中，待培养 基冷却至50 C左右时进行倒平板。(3)在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌， 以防止杂菌污染，a正确；划线时应避免划破培养基表面， 否则将不能形成正常菌落，b正确； 该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量， c 错误；培养基中的甲醇浓度越高，此种培养基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越强，因 此可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，可获得甲醇高耐受株， d正确。(4)酵母菌通过有 氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和氧气供应； 台盼蓝是大分子物质，不能将活细胞染色，再根据 25X 16型的血球计数板：1毫升悬液中待
测标本(菌体)总数=80小方格内菌体数/80 X 400X 10 4 X稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加 入，因此
2020版高考生物二轮复习8生物技术实践讲义
