项 目 方 法 抗链球菌溶血素O(ASO) 免疫比浊法 目 录
1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3.试剂 3.1 试剂 3.2校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性 4.仪器 5.操作 6.计算 7.操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8.参考值 9.临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理 660nm
样本中ASO + 包被SLO的胶乳 -----------------大分子免疫复合物
在660nm监测生成的复合物的浊度变化,与样本中ASO效价成正比。 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备:
病人空腹12h,不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外,对于体检者,采血的季节都应做相关记录,因为样本中各项目的含量有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血:
除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂:
最好不要使用血浆检测,不使用抗凝剂。 2.4 标本处理:
血标本室温放置30min~45min后离心分离血清,在两小时内检测完毕;如两小时内不能检测完毕,将离心分离血清置洁净试管加盖2-8℃保存。
3.试剂 3.1 试剂:
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ASO试剂盒,为液体双试剂,各组分如下:
组 成 R1:缓冲液 叠氮钠 R2:包被SLO的胶乳 叠氮钠 3.2:校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。 校准频次:
空白定标:每日需做试剂空白定标。
全点定标:试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围,需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性:
200mmol/L(PH=8.6) 0.09% 2.5mg/dL 0.09% 原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后,在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天,试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色,试剂R2颜色为乳白色,当试剂变色或出现沉淀,按照试剂失效处理。
多项免疫类标准液储存在2-8℃至标签所示失效日期。第一次开启后,不要冷冻。在2-8℃下将瓶盖拧紧保存,标准品可以储存长达6个星期的时间。
4.仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能:波长660nm,仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。 5.操作
样品为血清。本法为两点速率法。参数见后附,附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作,见仪器操作规程。 6.计算
A测定
C = ———— × C0
A标准
式中:c—— 测定血清ASO滴度,IU/mL;
A测定—— 标本管吸光度; A标准—— 标准管吸光度;
CO—— 校准液中ASO滴度,IU/mL;
7.操作性能 7.1 精密度:
批内CV< 3.10%,批间CV< 4.83%。 7.2 准确度:
检测结果的相对不准确度≤±10%。 7.3 灵敏度:
ASO滴度为:124U/mL时,比色吸光度变化率A660nm约0.006-0.007/分钟。 7.4 可报告范围:
血清与试剂用量之比为3:250:50时,测定上限为900IU/mL。 7.5 特异性:
测量值在给定值的90%-110%范围内。
7.6 干扰:
内源性干扰物溶血、脂血、黄疸对测试结果无明显影响。 8.参考值
成人:0-180IU/mL,儿童0-250IU/mL。 9.临床意义
链球菌溶血素O(SLO)是链球菌的一种胞外产物,它能溶解细胞膜从而导致溶血。抗链球菌溶血素(ASO)是SLO 的抗体。ASO测试能为早期的链球菌所导致的感染提供证据,主要应用于急性风湿热、链球菌感染后的血管球性肾炎、患有咽炎的个人以及其它急性感染。
通常,与抗原对应的抗体在急性链球菌感染后三周左右达到峰值,并保持在峰值水平3 - 4个月,然后逐渐降低到正常水平。
附录A: 参数