丁苯酞软胶囊对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用*
任 毅，王 斌
【摘 要】摘要 目的：探讨丁苯酞软胶囊对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用。方法：将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、丁苯酞软胶囊低剂量组和丁苯酞软胶囊高剂量组，每组10只。除假手术组外，其余3组均采用拴线法建立大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注损伤模型。术后24 h评估各组大鼠神经行为变化及大鼠脑梗死体积，检测超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)、Caspase 8及Caspase 9活性和丙二醛(MDA)含量，ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和IL-6含量，Western blotting检测核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达。结果：与假手术组比较，缺血再灌注组大鼠神经行为评分提高(P<0.01)，脑梗死体积增加(P<0.01)，MDA、TNF-α、IL-1β及IL-6含量增加(P<0.01)，Caspase 3、Caspase 8及Caspase 9活性上升(P<0.01)，Bcl-2表达量下调(P<0.01)，Bax、p-IκBα及p-NF-κB p65表达量上调(P<0.01)。与缺血再灌注组比较，丁苯酞软胶囊低、高剂量组大鼠神经行为评分降低(P<0.01)，脑梗死体积减少(P<0.01)，MDA、TNF-α、IL-1β及IL-6含量降低(P<0.01)，Caspase 3，Caspase 8及Caspase 9活性下降(P<0.01)，Bcl-2表达量上调(P<0.01)，Bax、p-IκBα及p-NF-κB p65表达量下调(P<0.01)。结论：丁苯酞软胶囊能显著的抑制缺血再灌注大鼠脑损伤，与阻断NF-κB信号通路有关。 【期刊名称】广西医科大学学报 【年(卷),期】2019(036)007
【总页数】4
【关键词】关键词 丁苯酞软胶囊；缺血再灌注；脑损伤 *基金项目：沧州市科学技术局基金资助项目(No.162302062)
缺血性脑血管病具有高发病率、高致残性、高致死性的特点，给患者及社会带来沉重的精神及经济负担[1-2]。缺血性脑血管病包括全脑缺血及局灶性脑缺血，是由于动脉血流被塞后所引起的代谢物供给失调，组织缺氧坏死的状态，当恢复血流及供氧后，组织损伤加重并坏死的一种病理反应[1-2]。目前临床上对此病的治疗手段还较为匮乏，远达不到治愈的效果。因此，深入探讨其发病机制及开发新药物具有重要意义[1-2]。丁苯酞软胶囊(商品名为恩必普)，是我国自主研发的具有知识产权的一类新药，能够用于治疗缺血脑卒中，对缺血区的脑血流量及微循环具有改善作用，同时，还能够抑制炎症反应及钙内流[3-4]。临床研究表明，丁苯酞软胶囊对卒中患者的神经功能具有保护作用[5-6]，但具体的机制仍有待于进一步研究。为此，本研究旨在探讨丁苯酞软胶囊对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用及相关机制，为丁苯酞软胶囊的临床应用提供实验及理论依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物 40只(200±20)g雄性SD大鼠，购于上海斯莱克实验动物有限责任公司，大鼠在25 ℃室温下自由饮食和摄水。
1.2 主要试剂及仪器 丁苯酞软胶囊购于石药集团恩必普药业有限公司，规格：0.1 g×24粒/瓶，批号：19010622，国药准字号：H20050299；丙二醛(MDA)含量、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性检测试剂盒购于南京建成生物技术有限公司；肿瘤坏死因子-
α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、IL-6酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购于武汉博士德生物技术有限公司；兔抗人Bax、Bcl-2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα、p-IκBα及GAPDH多克隆抗体购于Abcam公司；Chemi DocTM XRS+超高灵敏度化学发光成像系统购于伯乐生命医学产品(上海)有限公司；ELX800酶标分析仪购于美国Bio-Tek公司。
1.3 造模及分组 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、丁苯酞软胶囊低剂量组、丁苯酞软胶囊高剂量组，每组10只。除假手术组外，其余各组均采用改良的Zea-Longa法制备SD大鼠中动脉局灶缺血(MCAO)模型：100 g/L水合氯醛麻醉大鼠并使大鼠仰卧固定住，将大鼠颈部消毒并备皮，沿颈部皮肤正中做切口，使右颈总动脉(CCA)、右颈内动脉(ICA)、右颈外动脉(ECA)暴露并分离开，在距离ECA、ICA分叉5 mm处将CCA结扎，在ECA根部结扎ECA。将动脉夹置于ICA上，并在ICA、ECA分叉处附近的CCA做一个小切口，将尼龙线钝的一段插入CCA的切口上，插入深度约为18～20 mm，缺血造模成功。维持此过程2 h后，将尼龙线轻轻上提，使血液恢复灌注22 h。假手术组仅仅分离ECA、CCA及ICA，但不结扎CCA。丁苯酞软胶囊低剂量组、丁苯酞软胶囊高剂量组通过灌胃分别给予20 mg/kg、40 mg/kg的丁苯酞软胶囊，而假手术组及缺血再灌注组给予等量生理盐水[7-8]。
1.4 神经功能评分 参考Zea-Longa法对SD大鼠神经功能进行评分：大鼠没有神经功能缺陷征兆记为0分，大鼠没办法完全的伸展左前肢记为1分，大鼠向左侧转圈记为2分，大鼠向左侧倾倒记为3分。
1.5 梗死体积测定 将做完神经功能评分后的大鼠麻醉后迅速取脑，并切除小脑、嗅球等，对全脑以2 mm间距行冠状切片，并置于2%氯化三苯基四氮唑(TCC)
丁苯酞软胶囊对缺血再灌注大鼠脑损伤的保护作用
