第17讲 微生物的利用与酶的应用
[考纲要求] 1.大肠杆菌的培养和分离。2.分离以尿素为氮源的微生物。3.果汁中的果胶和果胶酶。4.α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测。
1．培养基与微生物培养
提醒 (1)LB固体培养基添加琼脂等凝固剂，用于单菌落的分离。
(2)全营养LB培养基与尿素固体培养基：①全营养LB培养基(含琼脂糖)是基础培养基；②尿素固体培养基：选择培养基(如以尿素作为唯一氮源的尿素培养基)和鉴别培养基(如尿素培养基中加入酚红)。
(3)加入尿素前的固体培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤。 2．灭菌与消毒的比较
类型 消毒方煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 适用范围 日常生活 不耐高温的液体 水源或生物体结构操作方法及注意点 100 ℃煮沸5～6 min 70～75 ℃煮30 min或80 ℃煮15 min 擦拭，如用70%酒精擦拭双手；成熟紫葡
法 部分等 萄用高锰酸钾浸泡5 min；外植体在70%酒精中浸泡10 min，再放入5%次氯酸钠溶液中浸泡5 min，然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5 min 紫外线 热水 灼烧 房间、仪器设备 泡菜坛等 接种环、接种时用的试管口或瓶口等 紫外线照射30 min 热水清洗坛内壁两次 直接在酒精灯火焰的外焰烧红接种环或试管口和瓶口过火 高压蒸汽灭菌锅内，条件一般为1 kg/cm2，灭菌方法 高压蒸汽 灭菌 生产和实验室常用器具，如培养基、培养皿等 温度121 ℃，15 min(若为葡萄糖，则灭菌条件为500 g/cm2压力，温度90 ℃以上，30 min)；灭菌时间从高压锅内有压力后开始；高压锅或灭菌锅压力和大气压相同时才能打开锅盖 G6玻璃砂漏斗过滤。G6玻璃砂漏斗使用过滤灭菌 尿素等加热会分解的物质 前用纸包好进行高压蒸汽灭菌；G6玻璃砂漏斗使用后用1_mol/L盐酸浸泡，抽滤去酸，再用蒸馏水洗至洗出液呈中性，干燥后保存 操作空间：专门的接种室； 其操作设备：超净台(用前打开紫外灯和过滤风，用时关闭紫外灯，台面用70%酒他 精擦拭)； 操作环境：酒精灯火焰旁
3．微生物分离的两种常用方法的比较
项目 划线分离法 连续划线。由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每操作原理 次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 操作工具 接种环 涂布分离法 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养皿表面形成单个菌落 玻璃刮刀
使用要求 分离特点 分离结果(图示) 用时需灼烧 操作简单，不易分离获得单菌落 放置在70%酒精中，用时需灼烧 操作复杂，易分离获得单菌落 相同点
提醒 划线分离操作的注意事项
(1)每次划线之前及最后一次划线之后都需要灼烧接种环。
(2)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。
(4)划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 4．大肠杆菌的培养与分离操作 (1)原理
①接种在LB液体培养基中使其快速分裂增殖。
使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种 ②将待检测微生物样品通过划线分离法或涂布分离法接种在LB固体培养基上，样品中的每一个细胞都可以生长繁殖形成单个菌落。 (2)流程
5．分离以尿素为氮源的微生物 (1)实验原理
①筛选以尿素为氮源的微生物，使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养。 ②有些细菌合成的脲酶能通过降解尿素作为其生长的氮源。
③细菌合成脲酶能将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强，pH升高，从而使加入酚红指示剂的培养基变红。
(2)操作步骤
2020高考生物浙江专用大二轮复习讲义：专题八 生物技术实践 第17讲 Word版含答案
