PCR引物流程设计详解

PCR引物设计流程详解

本文目的：复制出IL-4基因片段

一、查找基因序列

1、进入NCBI主页，下拉选框选择Nucleotide，在搜索栏输入要查找的目的基因，即IL-4，点击搜索

2 、在搜索结果选择灵长类（Homo sapiens）

2、在灵长类IL-4基因中选择需要的mRNA序列

3、查看基因的相关信息

外显子区域

CDs区域

4、点击FASTA格式，并将序列保存到文档

二、使用primer premier 5.0设计引物

1、建立新文件，将所得的序列复制进输入框内

2、点击搜索按钮，搜索引物

3、设置引物设计参数（因为在之前查找基因序列的时候获知，外显子区域分别为：1-200、201-248、249-425、426-618，又知在引物设计时引物位置最好跨越一个内含子，PCR产物长度通常为100-150bp，故设定上游引物位置为201-248，下游引物位置为249-425，产物长度为100-150bp）