其原理是：DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。
3.如何克隆一个新基因（cDNA的中间片段）？
在已知cDNA序列基础上克隆5’或3’端缺失序列的技术。根据已知序列设计基因片段内部特异引物，由该片段向外侧进行PCR扩增得到目的序列。此技术为RACE技术。 步骤：
5. 在反转录酶的作用下，以基因片段内部特异性引物（GSP1）启始cDNA第一条链合成。
6. RNase降解模板链mRNA，纯化第一链。
7. 用末端转移酶在cDNA链3’端加入连续的dCTP，形成oligodc尾巴。 8. 以连有oligo dC 的锚定引物和基因片段内部特异引物GSP2进行nest PCR扩增，得到目的基因5'端片段并检测。
3.SNP技术
SNP技术：是单核苷酸多态性，指基因组DNA序列中由于单个核苷酸（A，T，C和G）的突变而引起的多态性。
CHAP 6
1、基因敲除技术的基本原理。
基本原理：基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间
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的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点。 2.RNAi技术的基本原理。
基本原理：RNAi技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。
CHAP 7
3、操纵子、弱化子、葡萄糖效应（代谢物阻遏效应）、安慰性诱导物 操纵子：是基因表达的协调单位，由启动子、操纵基因及其所控制的一组功能上相关的结构基因所组成。操纵基因受调节基因产物的控制。
弱化子：当操纵子被阻遏，RNA合成被终止时，起终止转录信号作用的那一段核苷酸被称为弱化子。
安慰诱导物：如果某种物质能够促使细菌产生酶而本身又不被分解，这种物质被称为安慰诱导物，如IPTG（异丙基- β –D-硫代半乳糖苷）。
葡萄糖效应（代谢物阻遏效应）：有葡萄糖存在时，不论诱导物存在与否，操纵子都没有转录活性，结构基因都不表达。 2.乳糖操纵子的调控模型。 主要内容：
① Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码
② 这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I与O之间的启动子区（P），不能单独起动合成β-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。
③ 操纵基因是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点。 ④当阻遏物与操纵基因结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。
⑤诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵基因结合，从而激发lac mRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始mRNA的合成。 2.色氨酸操纵子的负控阻遏系统和弱化调控机制。
负控阻遏系统:色氨酸操纵子负责色氨酸的生物合成，当培养基中有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺乏色氨酸时操纵子被打开，trp基因表达，色氨酸或与其代谢有关的某种物质在阻遏过程（而不是诱导过程）中起作用。
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弱化调控机制: 细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的不足，因为阻遏作用只能使转录不起始，对于已经起始的转录，只能通过弱化作用使之中途停下来。阻遏作用的信号是细胞内色氨酸的多少；弱化作用的信号则是细胞内载有色氨酸的tRNA的多少。它通过前导肽的翻译来控制转录的进行，在细菌细胞内这两种作用相辅相成，体现着生物体内周密的调控作用。 2.为什么半乳糖操纵子需要双启动子？
双启动子的生理功能：这与半乳糖在细胞代谢中的双重功能有关。半乳糖不仅作为唯一碳源供细胞生长，而且与之相关的物质——尿苷二磷酸半乳糖是大肠杆菌细胞壁合成的前体。生长过程中细胞必须随时合成差向异构酶，以保证尿苷二磷酸的供应。在没有外源半乳糖的情况下，细胞通过半乳糖差向异构酶的作用由UDP-葡萄糖合成UDPgal。因为合成细胞壁过程中对异构酶的需要量很小，本底水平的永久型合成就能够满足生理需要。
CHAP 8
1、顺式作用元件、反式作用因子、基因家簇、断裂基因 顺式作用元件：影响自身基因表达活性的非编码DNA序列。
反式作用因子：能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。
基因家族：在基因组进化中，一个基因通过基因重复产生了两个或更多的拷贝，这些基因即构成一个基因家族，是具有显著相似性的一组基因，编码相似的蛋白质产物。
断裂基因：在一个结构基因中，编码某一蛋白质不同区域的各个外显子并不连续排列在一起，而是常常被长度不等的内含子所隔离，形成镶嵌排列的断裂方式。所以真核基因被称为断裂基因。 2.图示简要说明真核生物启动子的结构。
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2.说明DNA甲基化对基因转录活性的影响机理。为什么说甲基化密度与启动子强度之间的平衡决定了该启动子是否具有转录活性（可用图示说明）？ DNA甲基化导致某些区域DNA构象变化，从而影响了蛋白质与DNA的相互作用，抑制了转录因子与启动区DNA的结合效率。甲基的引入不利于模板与RNA聚合酶的结合，降低了转录活性
2、举例说明蛋白质磷酸化如何影响基因表达。 络氨酸受体蛋白激酶磷酸化导致细胞癌变：
络氨酸受体蛋白激酶与表皮生长因子(EGF)相结合后，刺激了该受体蛋白的激酶活性，引发一系列生理反应。原癌蛋白ErbB虽然没有正常络氨酸受体蛋白激酶的胞外结构域，其胞内结构域却具有蛋白激酶活性，刺激细胞持久分裂，诱发癌变。
3.cDNA的合成包括第一链和第二链的合成：第一链cDNA的合成是以mRNA为模板，反转录成cDNA，由反转录酶催化，该酶合成DNA时需要引物引导，常用的引物是oligo dT 。oligo dT引物一般包含12~20个脱氧胸腺嘧啶核苷酸，
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后面加一个连接引物以便于克隆构建。
第二链的合成是以第一链为模板，由DNA聚合酶催化。常用RNaseH 切割mRNA–CDNA杂合链中的mRNA序列所产生的小片段为引物合成第二条cDNA的片段，再通过DNA连接酶的作用连成完整的DNA链。
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