●非编码区较多 多于编码序列(9:1) ● 含有大量重复序列
2.原核、真核生物DNA聚合酶的特性。
㈠原核生物中的DNA聚合酶(大肠杆菌） 性质 3' 5 '外切活性 5' 3 '外切活性 5' 3 '聚合活性 新生链合成 功能 聚合酶Ⅰ + + + 中 - 聚合酶Ⅱ + - + 很低 - 聚合酶Ⅲ + - + 很高 + 主要是对DNA损伤的修复紫外光引起DNA 复制的主要聚合酶，修复；以及在DNA复 的DNA损伤还具有3’-5’外切酶的制时切除RNA引物并校对功能，提 填补其留下的空隙。高DNA复制的保真性 ㈡真核生物中的DNA聚合酶
定位 α 细胞核 β 细胞核 - 修复作用 线粒体核DNA的RNA引物去掉后把缺口补全 γ 线粒体 + δ 细胞核 + ε 细胞核 + 3’-5’外 - 切酶活性 功能 引物合成 DNA的复复制 制 2.细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进行修复？简述DNA错配修复的过程。
DNA修复系统 错配修复 碱基切除修复 功能 恢复错配 切除突变的碱基 1 / 1
核苷酸切除修复 DNA直接修复 DNA错配修复的过程
修复被破坏的DNA 修复嘧啶二体或甲基化DNA
●Dam甲基化酶使母链位于5’GATC序列中腺甘酸甲基化 ●甲基化紧随在DNA复制之后进行
●根据复制叉上DNA甲基化程度，切除尚未甲基化的子链上的错配碱基
CHAP 3
1、基因、启动子、增强子、全酶、核心酶、核酶、三元复合物、SD序列 基因，分子生物学定义：产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核甘酸序列。
启动子：指能被RNA聚合酶识别、结合并启动基因转录的一段DNA序列。 核心酶：大肠杆菌RNA聚合酶由2个α亚基、一个β亚基、一个β′亚基和一个w亚基组成核心酶 全酶=核心酶+ σ因子
增强子：能提高转录起始效率的序列被称为增强子或者强化子
三元复合物：开放复合物与最初的两个NTP相结合，并在这两个核苷酸之间形成磷酸二酯键后，转变成包括RNA聚合酶，DNA和新生的RNA的三元复合物 SD序列：mRNA中用于结合原核生物核糖体的序列 ? 比较原核生物和真核生物mRNA的特点。
大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 亚基 基因 相对分子量 亚基数 组分 功能 α β rpoA rpoB 36500 151000 2 1 核心酶 核心酶 核心酶组装，启动子识别 β和β'共同形成RNA合成的活性中心 β' rpoC 155000 1 核心酶 1 / 1
ω ？ σ rpoD 11000 70000 1 1 核心酶 σ因子 ？ 存在多种σ因子，用于识别不同的启动子 真核生物RNA聚合酶 酶 位置 转录产物 相对活性 对α-鹅膏蕈碱的敏感性 RNA聚合酶Ⅰ 核仁 rRNA 50-70% 不敏感 RNA聚合酶Ⅱ 核质 hnRNA 20-40% 敏感 RNA聚合酶Ⅲ 核质 tRNA 约10% 存在物种特异性 2.真核生物的原始转录产物需要经过哪些加工才能成为成熟的mRNA？ 真核生物的原始转录产物需要经过的加工过程有：
1、在5’端加帽。5’端的一个核苷酸总是7-甲基鸟核苷三磷酸（m7Gppp）。mRNA5’端的这种结构称为帽子（cap）。
2、3’端加尾，多聚腺苷酸尾巴提高了mRNA在细胞质中的稳定性 3、RNA的剪接。参与RNA剪接的物质有snRNA（核内小分子RNA） ? 、snRNP（与snRNA结合的核蛋白） 4、RNA的编辑
2.原核启动子和真核启动子的构成 一、原核生物启动子结构有
TATA区：酶的紧密结合位点（富含AT碱基，利于双链打开） TTGACA区：提供了RNA聚合酶全酶识别的信号 二、真核生物启动子的结构
?核心启动子 TATA 常在-25bp左右，相当于原核的-10序列T85A97T93A85A63A83A50
核心启动子●定义：指保证RNA聚合酶Ⅱ转录正常起始所必需的、最少的DNA序列，包括转录起始位点及转录起始位点上游TATA区 ●作用：选择正确的转录起始位点，保证精确起始
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?上游启动子元件，包括CAAT盒（CCAAT）和GC盒（GGGCGG）等 ●作用：控制转录起始频率。
CHAP4
1、遗传密码有哪些特性？理解掌握其摆动性 特性：连续性，简并性，通用性与特殊性，摆动性 摆动性：
转运氨基酸的tRNA上的反密码子需要通过碱基互补与mRNA上的遗传密码子反向配对结合，在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱基配对原则，第三对碱基有一定的自由度，可以“摆动”，这种现象称为密码子的摆动性。
2.tRNA中起作用的重要两个臂是什么臂？ 受体臂和密码子臂。 tRNA有两个关键部位：
● 3’端CCA：接受氨基酸，形成氨酰-tRNA。 ● 与mRNA结合部位—反密码子部位
2.肽链延伸由许多循环组成，每加一个氨基酸就是一个循环，每个循环包括哪些步骤？
?每个循环包括：AA-tRNA与核糖体结合、 肽键的生成 和 移位。 ?AA-tRNA与核糖体结合需要消耗GTP，并需EF-Tu、EF-Ts两种延伸因子 ?肽键的生成是由转肽酶/肽基转移酶催化
?移位，核糖体向mRNA3’端方向移动一个密码子。 需要消耗GTP，并需EF-G延伸因子
2.真核生物和原核生物在翻译的起始过程有哪些区别？
真核生物：起始密码子AUG 所编码的氨基酸是Met，起始AA-tRNA为Met-tRNAMet。
原核生物：起始密码子AUG 所编码的氨基酸并不是 甲硫氨酸本身, 而是甲酰甲硫氨酸（fMet），起始AA-tRNA为fMet-tRNAfMet 2.同工tRNA、分子伴侣、信号肽、核定位序列
同工tRNA：代表同一种氨基酸的tRNA称为同工tRNA。
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分子伴侣：它是细胞中一类能够识别并结合到不完全折叠或搭配的蛋白质上以帮助这些多肽正确折叠、转运或防止它们聚集的蛋白质，其本身不参与终产物的形成。
信号肽：常指新合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移的N-末端氨基酸序列（有时不一定在N端）。
核定位序列：蛋白质中的一种常见的结构域，通常为一短的氨基酸序列，它能与入核载体相互作用，将蛋白质运进细胞核内。
CHAP 5
1、比较PCR扩增和细胞内DNA复制的异同。
PCR技术 DNA生物复制
环境 体外复制， 加热，90摄氏度左右 体内，温和的环境 模板 DNA单链 DNA单链
原料 4种脱氧核糖核苷酸 4种脱氧核糖核苷酸
酶 主要是DNA聚合酶 DNA解旋酶，DNA聚合酶， DNA连接酶等各种酶 引物 需要人工合成的引物 自己合成引物成分 步骤 变性--退火--延伸 解旋-起始-延伸-结束 原则 碱基互补配对原则 碱基互补配对原则 2.设计一个典型的PCR扩增程序和PCR反应体系。
在一个典型的PCR反应体系中需加入：适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性多聚酶、Mg2+和两个合成的DNA引物。
PCR扩增，模板DNa 94℃变性1min，引物与模板40～60℃退火1min，72℃延伸2min。在首次循环前模板预变性3～5min；在末次循环后，样品仍需继续延伸3～5min以上，确保扩增的DNA为双链DNA。 其程序步骤为：
94℃预变性3min； 94℃变性30s； 58℃退火30s； 72℃延伸1min30s 进行30cycle； 72℃继续延伸4min； 4℃pause
2、在基因操作实践中检测核酸相对分子量的最常用方法是什么？其原理是什么？
检测核酸相对分子量的最常用方法：核酸凝胶电泳、分光广度法
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分子生物学终极复习资料汇总
