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水中稀释，抽入灭过菌的注射器，在无菌操作下，每支斜面培养基上滴几滴孢子水；也可用接种环蘸孢子水在培养皿琼脂上划线接种。待孢子萌发后，挑取萌发早长势好的菌落进行转管培养(图14)。
平菇孢子的采集还有以下2种简便的方法：一是选正在弹落孢子的鲜平菇，用接种环探入菌褶中刮一下，刮取担孢子，移接于试管内的斜面培养基上进行培养；二是将弹放孢子的鲜平菇菌褶朝上平放在台面上，将灭过菌的大试管拔去棉塞，管口朝下向平菇菌褶揿压下去，使平菇子实体像试管塞一样留在试管内，然后用接种工具将其向管内推进3厘米，再塞上棉塞，试管口朝上，菌褶向下，2天以后当试管壁上落有孢子时，应及时在接种箱内将平菇的子实体取出，试管内的孢子可挑取少许用无菌水稀释接种，也可直接在培养基上划线培养。此种方法简便易行，采集野生菌种也可用此法。
经上述方法所得到的菌种试管，在25℃的培养条件下培养，菇木和组织分离法的试管2～3天就可看到菌丝生长，孢子分离法需1周左右才能看到孢子的萌发，此时应检查菌丝生长情况，淘汰污染的及未萌发的试管。挑选发育健壮的菌落，分离扩大培养，所得平菇纯菌种，需经出菇试验，观察子实体生育情况，选择长势旺、出菇快而且具有种源特性的株系扩大繁殖，才能用于生产上。 二、菌种分级
根据菌种的来源、转接方式及生产目的，通常把菌种扩接分为一级种、二级种和三级种3种类型。
(一)一级种(母种) 以科研或生产需要为依据，用常规标准或特定标准选择种源，而特定标准又是在常规标准达标的基础上再进行选择的。从种源获得纯菌丝后，再经出菇等一系列试验，证实是具有生产价值的菌株，经转管、扩大培养后提供给生产者。一般一级种采用玻璃试管为容器。
(二)二级种(原种) 来自一级种的扩大，但其数量依然较少，还需再次扩大，实际上它是一级种和三级种之间的过渡种。通常在栽培季节前三四个月制备二级种，以供扩大生产之需。一般采用菌种瓶或盐水瓶等玻璃制品为容器，也可用塑料袋制种。
(三)三级种(栽培种) 直接用于生产栽培上，它是由二级种扩大繁殖而来。通常根据灭菌条件采用聚丙烯或聚乙烯塑料袋为栽培容器。 3种类型菌种的生产工艺流程如下。 三、菌种扩大繁殖
(一)一级种的接种 先将接种箱(室)进行清洁处理，将要接种的斜面培养基试管及其他工具放入接种箱(室)。用新洁尔灭等消毒剂对接种箱(室)内喷雾，然后用电子灭菌器或紫外
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线灯照射。熏蒸消毒用无公害农药将菌种试管用0．1％高锰酸钾溶液浸洗消毒，或自操作孔将菌种带入接种箱用70％酒精棉球擦试管口壁。打开工作灯，将双手伸人接种箱内，点燃酒精灯。
将原始菌种试管和待接种的斜面试管并列于左手中，试管的斜面均朝上。右手拿接种钩在火焰上烧红灭菌，冷却待用。将左手上的试管口靠近火焰边，用右手小指和手掌同时夹住两个试管的棉塞，在火焰上方拔去棉塞，并用接种钩挑取米粒大小的原始菌种块，迅速移至待接种的试管斜面上，抽回接种钩，塞上棉塞(请参阅金盾版《金针菇高产栽培技术》图4-5)。一支接一支，周而复始，1支菌种试管可扩接60～80支斜面试管。
接种过程中，要注意试管口不要远离酒精灯火焰，并要注意保持试管与桌面平行。接种完毕，马上贴上标签，注明菌名及接种日期，放人适温培养，以免带来混乱，造成不良后果。因为在目前条件下，一般是很难从试管内菌丝生长形态来判别同一菌类不同品系之间的差异。
(二)二级种的接种 操作方法基本与一级种相似，所不同的是瓶子与试管的差别。 为了方便操作，可在接种箱内先放一粗铁丝弯成的或木板做成的瓶架子。将灭过菌的培养料瓶连同接种工具放入接种箱内，按常规进行消毒、灭菌。
接种时，将瓶颈搁在架子的凹陷处，瓶口对准酒精灯火焰，左手握试管紧靠瓶子上方，右手握接种钩，经火焰灭菌后使其弯钩朝上，将蚕豆大小的菌种块移至原种瓶内，塞上棉塞即成(图15)。换一瓶再进行接种，周而复始，1支斜面试管母种可接5～8个培养瓶。
操作时应注意不能将菌种瓶口朝上，同时拔出的棉塞不要碰到其他器具或接种箱壁，可以在接种箱底放一块带有酒精的脱脂棉块，将棉塞放在上面，或用右手小指及手掌夹住棉塞。若菌种块掉在箱底应弃之不用。每接完1支母种后，接种工具应重新火焰灭菌。待二级种全部接完，开启箱盖，要在瓶上标明菌株号码及接种日期。
平菇菌丝生长速度较快，在木屑培养基上，每天生长5～6毫米，一般原种25～30天就
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可以发满瓶；在麦粒培养基上生长更快，15～20天就可接栽培种。
(三)三级种的接种 原种扩大繁殖就成栽培种，栽培种也就是直接用于大生产的生产种，又称三级种。栽培种在培养料的配方、制作、灭菌、接种和培养等方面，均与原种生产相同，所不同的是种源。原种是用母种移接，而栽培种则利用原种移接，其培养容器有瓶子、聚丙烯(聚乙烯)塑料袋。将待接种的菌种瓶(袋)横放在接种箱内，同时将接种工具及所需物品一并放入箱内，按常规方法进行消毒、灭菌。事先将二级种菌种瓶在高锰酸钾溶液中浸洗，接种时带入接种箱内，置于接种架上。 接种时打开种瓶棉花塞，用沾有酒精的脱脂棉在瓶口内壁进行擦洗，然后将瓶口在酒精灯的火焰上边转边烧，消毒灭菌。将二级种瓶放置接种架上，瓶口靠近酒精灯，左手持三级种瓶，右手小指及手掌夹住棉塞并打开，用长柄镊子或接种铲将二级种移入三级种瓶内，再塞紧棉塞即成(图16)。每瓶二级种可接种三级种50～60瓶。 四、菌种培养的一般要求
在菌种培养过程中，要根据不同菌株、不同发育阶段以及培养期内气象因素综合考虑，创造最好的培养环境。
(一)温度 培养室内温度要根据季节变化进行控制。秋栽平菇菌种生产基本上是高温季节，生产和管理如有不当，菌种极易污染，也易烧伤和老化。因此，减少和防止高温影响是提高栽培种成品率，保证秋菇适时种植的关键。可以采取以下几种措施。
1.降低环境温度 当气温达到35℃以上时，要停止接种或接种时间改在气温较低的夜间进行。菌种培养场所可采用遮阳和隔热措施来降温，如门窗外设置遮阳棚架，墙体和屋面用石灰水涂白或用泡沫板外加塑料薄膜覆盖隔热。
2.降低箱温 高温季节接种，箱内采用酒精灯火焰杀菌，能使箱温高达40℃～50℃，极易烧伤或烫死菌种。因此，接种要尽量安排在早晚或夜间进行。接种时可省去棉塞过火灭菌这道程序，以免箱温升高。接种箱内必须严格消毒与灭菌。接种用量要相对加大，使菌种能尽快地封住接种穴表面或料面，以减少杂菌的污染。箱内用无公害无残留药剂喷雾或熏蒸消毒灭菌。
3.控制菌温 菌种培养时因自身呼吸放出的热量而易使菌温比一般室温高3℃～5℃。在高温环境下，若菌种密集堆放，且通风不良，菌温还会上升而形成烧堆，使菌种大量烧伤和烫死，并导致杂菌大量发生。所以菌种的培养场地除保持清洁、干燥、凉爽、无阳光照射外，还要求通风换气条件好。确定瓶装菌种堆放的高度和堆间的距离时，要掌握不产生堆温，有利于通风，方便管理这个原则，袋装菌种一般不能多层堆放，且袋与袋之间要留有空隙。 冬季制种，室温一般不能满足菌种对温度的要求。因此，要以保温为重点，采取电加温、炭火加温、炕道加温等措施以提高室温。但必须注意到加温的同时会带来湿度、通气等新矛盾。
(二)湿度 冬季空气相对湿度低，加温使室内更显得干燥，如不及时采取措施，会影响菌丝的生长蔓延。通常采用的办法是挂湿布，向地面洒水，拖湿地板，或用炭火炉烧水以提
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高空气相对湿度。
(三)通风 在加温的同时，一定要注意培养室内外的气体交流，培养室的墙对角应开小的通风窗口。如采用木炭、蜂窝煤炉等加温，更应注意增设通气管，将烟和煤气排出室外，否则菌丝仅长在培养基的外层而不向内部发展延伸。
(四)光 在营养菌丝培养阶段均不需要光线，培养室要尽可能暗一些，长期见光，容易使营养菌丝转人生殖生长，消耗养分，使菌种的生活力降低。
培养过程中还需要注意的是：塑料袋菌种在培养过程中，不能经常搬动、检查。因检查菌种习惯上往往提住袋口，一提一放，造成袋口内外气压差，杂菌会乘虚而入。同时，塑料袋壁较薄，经常移动会造成机械破损，出现微孑L，引起菌种袋两个角的后期污染，因此，在接种后必须注意这一问题。在排放菌袋时要留有空隙，便于观察，以利于提高成品的产量并降低成本。
五、菌种培养、扩制方法
(一)液体菌种培养法 分为摇瓶振荡和发酵罐深层搅拌通气2种方法，现介绍前一种方法。
1.基本生产设备 在小型生产中，一般用摇瓶机制作液体菌种。常用的摇瓶机有电动往复式和旋转式两种：往复式摇瓶机，振幅(往返距)为8～10厘米，振荡频率80～100次／分(图17)；旋转式摇瓶机，利用旋转的偏心轴使托盘摆动。偏心距4厘米，振荡频率150～200次／分(图18)。在无电力的情况下可以用儿童车改制成摇床的床架，以手或脚替代马达的功能，每隔一定的时间有规律地推动1次。
2.装瓶及灭菌 培养容器可用250毫升，500毫升，1 000毫升和5 000毫升的三角烧瓶，培养基的装量为容器的1／5。一般以8层纱布做成8厘米×8厘米的瓶塞，塞入瓶
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口，并用油纸包扎，在117．77～137．29千帕(1．2～1．4千克／平方厘米)下灭菌40分钟。灭菌后按无菌操作要求，根据液体培养基的多少，每瓶接入1～4块斜面种(每块O．1～O．5平方厘米)，或接人1％～5％的液体种。接种后用原塞瓶口的纱布展开后盖在瓶口，并用绳扎牢，静置培养1～2天，再置摇瓶机上振荡培养。
(二)简易深层发酵扩制菌种 食用菌液体发酵扩制菌种，长势旺盛，菌龄整齐，菌丝生长速度比常规育种快约10倍，麦粒料中，3～5天就能长满瓶。将20 9／6～100％液体菌种拌入栽培料中，平菇、金针菇等10～20天就可出菇，香菇40天也能出菇，能使成本降低，产量提高。但就目前来说，深层发酵设备投资多，技术要求高，大面积推广有困难。
第五节 平菇母种、原种和栽培种的制备
平菇是食用菌中人工栽培最广泛的品种，供栽培的菌株多，适于栽培的原料来源广，其菌丝生长速度快，抗逆性较强。同属的品种如姬菇、秀珍菇、小平菇等的制种方法与平菇相似。
1．平菇母种的制备
(1)菌种的分离和纯化平菇菌种的分离主要采用子实体的组织分离法。由于平菇的菌盖大而厚实，菌柄是延生的，用菌盖进行分离容易获得成功。分离与纯化的操作步骤见第三章有关部分的介绍。 (2)母种的制备 ①培养基的配方
马铃薯蔗糖琼脂培养基：配方同前。
马铃薯综合培养基：马铃薯(去皮)200克，蔗糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂20克，水1 000毫升。
麦麸综合培养基：马铃薯(去皮)200克，麦麸50克，蔗糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂20克，水1 000毫升。
木屑综合培养基：马铃薯(去皮)200克，阔叶树木屑100克，蔗糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂20克，水1 000毫升。
以上培养基配制后酸碱度调节至pH值为6～6．5。
平菇母种培养基的配方种类繁多，以上几种是最常用的，配制方法见第三章中的介绍。 ②母种的扩大繁殖方法：与香菇制种相同。 2．原种的制备 (1)培养基的配方
①棉籽壳培养基：纯棉籽壳加水至含水量60%，搅拌均匀即可。
②棉籽壳石灰培养基：棉籽壳99％，石灰1％，加水至含水量60％，搅拌均匀。
③豆秸培养基：大豆秸88．5％，麦麸(或米糠)10％，石膏1％，石灰0．5％，含水量60％。
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