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微生物检验
第二十八章 真菌检验
本章内容 真菌的基本特性
真菌的基本微生物检验方法 病原性真菌
一、真菌的基本特性
真菌是真核细胞型微生物，属于真菌界。
具有典型细胞核，有完整细胞器，不含叶绿素；寄生或腐生方式生存，由单细胞或多细胞组成；细胞壁含几丁质和（或）纤维素；能进行有性生殖和（或）无性生殖。 分类
绝大多数对人类有益，如食用真菌及能产生抗生素的真菌等。能引起人类和动物疾病的真菌仅150余种。
分为黏菌、真菌两个门。其中与医学有关的真菌主要属于接合菌亚门、子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门，鞭毛菌门中仅腐霉属在医学上有重要性。绝大部分致病性真菌属于半知菌亚门。
结构 基本结构为菌丝和孢子。
菌丝：真菌在适宜环境中，由孢子生出芽管逐渐延长或呈丝状，称为菌丝。菌丝继续生长并向两侧分支，交织成团，称为丝状体。
营养菌丝：伸入到培养基内的菌丝。
气中菌丝：露出培养基表面的（部分气中菌丝可产生有性或无性孢子的称为生殖菌丝）。
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临床检验技士考试辅导 孢子
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有性孢子：同一个菌体或不同菌体上的两个细胞融合形成。
无性孢子：菌丝直接生成，并不发生细胞融合。致病性真菌多为无性孢子。 真菌孢子与细菌芽孢区别
区别要点 形态大小 产生数目 形成部位 热耐受性 生物功能
真菌与细菌区别
特征 核 真菌 真核细胞 （有核仁和核膜） 细菌 原核细胞 （无核仁和核膜） 无线粒体和内质网,有中介体 缺少固醇（除支原体） 肽聚糖为主 芽孢，是一种生存方式 无 某些不需要碳有机物；某些为专性厌氧 真菌孢子 大 一条菌丝可产生多个 细胞内、外均可形成 不强，60～70℃短时死亡 重要的繁殖方式 细菌芽孢 小 一个细菌只形成一个 只在细胞内形成 强，煮沸短时间内不会死亡 非繁殖方式 结构 细胞浆 有线粒体和内质网 细胞膜 含固醇 细胞壁 几丁质或葡聚糖为主 孢子或芽孢 有性和无性孢子，是繁殖方式 双相性 代谢
培养与繁殖
气体环境：需要较高的湿度和氧气。
有（某些真菌） 需碳有机物；无专性厌氧菌 温度酸碱：22～28℃，某些深部病原性真菌在37℃生长良好，pH 5.0～6.0。 培养特点：最常用沙保弱培养基，生长缓慢。
多数真菌是以出芽、形成菌丝、产生孢子以及菌丝分枝与断裂等方式进行繁殖。 抵抗力
对热的抵抗力不强，一般60℃1h即被杀死。
对干燥、日光、紫外线及多数化学药品的耐受性较强；对1%～3%苯酚、2.5%碘酒、0.1%的升汞及10%甲醛比较敏感；
对常用抗生素均不敏感，灰黄霉素、制霉菌素、两性霉素等对某些真菌有抑制作用。 致病性
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真菌性变态反应：真菌过敏。
真菌毒素中毒：真菌中毒、真菌毒素致癌。
二、真菌的基本微生物检验方法 直接检测法
1.不染色标本的直接检查：用低倍镜和高倍镜检查，观察时有酵母型细胞、菌丝、菌丝体和孢子。 2.染色标本检查：观察酵母型细胞、菌丝、菌丝体和孢子。
（1）革兰染色：适用酵母菌和类酵母菌，酵母型细胞和菌丝、孢子被染为G紫色。 （2）墨汁负染色：适用隐球菌。可见新型隐球菌宽厚荚膜。 （3）乳酸酚棉兰染色：适用各种真菌的检查。酵母型细胞、菌丝和孢子被染为蓝色。 （4）瑞氏染色：适用于骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌。
3.直接检测抗原：可以用乳胶凝集试验、ELISA检测血清和脑脊液标本中的隐球菌抗原。也可以用胶乳聚集试验检测标本中白色念珠菌抗原。 培养检查法 1.常用真菌培养基
沙保弱培养基：深浅部真菌的常规培养； 皮肤真菌试验培养基：分离皮肤真菌；
左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基：分离新生隐球菌； 马铃薯葡萄糖琼脂：观察真菌菌落色素，用于鉴别真菌； 脑心葡萄糖血琼脂：培养深部真菌，使二相性真菌呈酵母型； 尿素琼脂：鉴别酵母菌和类酵母菌，石膏样毛癣菌和红色毛癣菌； 玉米粉聚山梨酯-80琼脂：培养白色假丝酵母菌。 2.培养方法
试管培养：是真菌分离培养、传代和保存菌种最常用方法。
玻片培养：主要用于在显微镜下观察真菌的自然形态和结构及生长发育的全过程。可用于真菌菌种鉴定。
平皿培养：观察菌落形态，只能培养生长繁殖较快的真菌。
3.鉴定：主要依靠菌落特点、菌丝和孢子的形态特点，菌丝体上有无特殊的结构。 生化反应
常用的有糖类发酵试验、同化碳源试验等。 真菌毒素检测
生物学方法、薄层层析法、液相色谱法、间接竞争ELISA法等。 药敏试验
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临床检验技士考试辅导 定量试验：观察最小抑菌浓度。
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定性试验：将受试菌对药物的敏感性进行分级。 根据培养基不同主要分为液基法和固基法。
三、病原性真菌
生物学性状
形态：圆形或卵圆形。 染色：G，着色不均匀。 繁殖与培养：
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（一）假丝酵母菌（俗称念珠菌）
出芽繁殖，称芽生孢子。孢子伸长成芽管，不与母菌体脱离，形成较长的假菌丝。
在普通琼脂、血琼脂与沙保弱培养基上均生长良好。需氧、室温或37℃孵育1～3天，菌落呈典型类酵母型菌落。 微生物检验
1.直接镜检：镜下可见假菌丝和厚膜孢子。
2.分离培养及鉴定
常用白色假丝酵母菌鉴定方法： 1）芽管形成试验 2）糖同化或发酵试验
3）厚壁孢子形成试验：玉米粉琼脂。 4）商品化产色培养基可用于快速鉴定。 临床意义
对人有致病性的主要有：白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌等。其中以白假丝酵母菌的感染最为常见。它们大多是人体正常菌群，感染既可以是内源性，也可以是外源性的。 浅部假丝酵母菌病：鹅口疮、阴道炎、角膜炎、甲沟炎等。
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全身性感染：支气管、肺假丝酵母菌病、假丝酵母菌性肠炎，假丝酵母菌性膀胱炎或肾盂肾炎、假丝酵母菌性心内膜炎等。
（二）隐球菌（新型隐球菌） 生物学性状
形态：圆形的酵母型菌，外周有荚膜。常见出芽现象。 染色：一般染色法不着色，印度墨汁作负染色镜检。 繁殖与培养：
新型隐球菌在沙保弱和血琼脂上25℃和37℃均可生长，典型酵母型菌落。 抗原：新型隐球菌荚膜多糖抗原，分4个血清型。
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1.直接镜检：标本中菌体较大，呈较大的球形，菌体周围有肥厚的荚膜，印度墨汁染色镜检。 2.分离培养及鉴定
常用隐球菌鉴定方法
（1）尿素酶试验：新型隐球菌可产生尿素酶，而白色念珠菌为阴性；
（2）糖同化及发酵试验：新型隐球菌、浅白隐球菌等可同化纤维二糖、肌醇等，但均不能发酵糖类； （3）酚氧化酶试验：接种左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基，经2～5d，新型隐球菌呈棕黑色菌落。 3.直接检测抗原：乳胶凝集试验、ELISA。 4.PCR检测
致病物质：新型隐球菌的致病物质是荚膜。 临床意义
隐球菌属中新型隐球菌为主要的人类病原菌。其感染属外源性感染。可经呼吸道侵入人体，由血流播散至脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。隐球菌病好发于免疫功能低下者，特别是隐球菌性脑膜炎。
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临床检验技士-微生物检验 讲义 28 - 图文
