HPLC法测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱
的含量
【摘要】 ［目的］建立高效液相色谱法测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)含量的方法。 ［方法］C18色谱柱，流动相为乙腈―50mmol?L-1NaH2PO4水溶液（磷酸调PH=2.5）（25∶75），流速1.0mL?min-1，室温， UV 348 nm检测。［ 结果］盐酸小檗碱在 0.106～0.530μg（n=5）范围内线性关系良好（r=0.9999）；方法精密度RSD为0.7%（n=6）。4批样品盐酸小檗碱的含量分别为19.11、18.81、18.83、18.92mg/100mg。［结论］方法专属性强、简便、准确；为该药提供了切实可行的质控方法。
【关键词】 骨质宁搽剂;盐酸小檗碱;含量测定;HPLC
Abstract:［Objective］To develop an HPLC method for the determination of berberine hydrochloride in GuZheNing liniment.［
Methods］The chromatographic system consisted of Dimonsil C18 column and mobile phase of acetonitrile―50mmol?L-1 sodium dihydrogen phosphate (adjusted PH to 2.5 with H3PO4) (25∶75). The flow rate was 1.0 mL?min-1， and the detective wavelength was at 348 nm.［Results］The
calibration curve was linear in the range of 0.106～0.530 μg（n=5）.The method was proved to be repeatable with RSD 0.7%（n=6）.4 batches of sample were analyzed and the Berberine Hydrochloride contents were
19.11， 18.81， 18.83， 18.92mg/100mg， respectively.［Conclusion］The method is selective， simple and accurate， and could be used for the quality control of this preparation.
Key words: GuZhiNing ， Berberine Hydrochloride， assay， HPLC
盐酸小檗碱有较强的抗菌等药理作用，为黄连、黄柏、功劳木等中药材中的主要有效成分，在中药成方制剂质量标准中较多的选用为含量控制指标［1］。骨质宁搽剂是由云母石、黄连、枯矾组成的中药成方制剂，其已有国家标准（标准编号：WS3―B―3945―98）的含量测定项是采用薄层色谱扫描法。在此标准的基础上我们进行了本注册药品的系列质量研究，并建立了用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，方法专属性强、操作简便、灵敏、准确。为该药提供了切实可行的质控方法。
1 仪器与试药
美国WATERS 高效液相色谱仪，510泵，484紫外检测器；N2000色谱工作站（浙江大学）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所：供含量测定用，批
号110713－200208）。骨质宁搽剂：规格为每瓶50mL；乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱：Dimonsil C18，5μm，4.6mm×150mm，室温；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节pH至2.5）（25：75）；流速为1.0mL?min-1；理论板数以盐酸小檗碱计算为7000；主峰与前相邻峰的分离度为2.4；UV检测波长为348 nm；对照品溶液进样10μL， 供试品溶液进样5―10μL，外标法定量。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，用甲醇配制成浓度为200μg ·mL-1的溶液，再用流动相稀释10倍（1→10），配制成浓度为20μg?mL-1的溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取本品2mL，置10mL量瓶中，加入流动相至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
3 方法学考察
3.1.1 专属性 按处方制备不含黄连的阴性样品，按拟定的方法处理样品并测定，在小檗碱出峰区未见干扰峰（见图1―A）。
3.1.2 线性关系及范围 用甲醇准确配制每mL含盐酸小檗碱212μg的对照品溶液，再用流动稀释10倍（1→10），配制成浓度为21.2μg?mL-1的溶液，依次准确进样5、10、15、20、25μL，按上述色谱条件测定峰面积， 以峰面积对进样量（μg）作回归处理，得回归方程和相关系数：
Y= 2.1×103+2.955×106X r= 0.99999
结果表明盐酸小檗碱在0.106～0.530μg范围内呈良好线性关系。 3.1.3 重复性试验 取同批样品（批号041102）6份，分别依法处理、进样5μL测定，盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.7%，示方法重复性良好。 3.1.4 仪器精密度及样品溶液的稳定性
按上述色谱条件，精密吸取样品含量测定下对照品溶液10μL，重复进样5次，记录对照品峰面积积分值，RSD为0.3%。同时按拟定的方法，取样品
（041102）一份，于10小时内，每间隔2小时测定一次，峰面积×105依次为：5.72、5.78、5.79、5.72、5.79，平均值为5.76，RSD为0.6％，溶液稳定。 3.1.5 回收率试验
采用加样回收。精密量取已测含量的供试品（041102）1mL于10 mL量瓶中，加对照品溶液（0.212mg/ mL）600μL，用流动相稀释至刻度，摇匀。共制取6份，依法测定，结果见表1。
表1 回收率测定结果（略）
4 样品测定结果
按所拟定的方法测定了四个批号(041102、041219、041222、041225)的样品，平行取样2份，测定，结果（mg/100mL）分别为：19.11、18.81、18.83、18.92，平均为18.9 mg/100mL。对照和样品的HPLC图见图1―B和图1―C。
图1 阴性样品（A），对照品（B）与样品（C）HPLC图（略） 1.盐酸小檗碱（berberine hydrochloride，13.9 min） 5 讨论
5.1 检测波长 用本流动相溶解的盐酸小檗碱对照品溶液作紫外扫描，显示于228、264、348、425 nm波长处有最大吸收。于348nm处检测阴性样品无干扰且主峰灵敏度理想，遂选择348nm为检测波长。
5.2 柱效要求 曾采用Inertsil C18色谱柱，主峰与前相邻峰的分离度可达1.8，但理论板数以盐酸小檗碱计算仅为2800；后改用Dimonsil C18，理论板数可达7000以上，获得满意的结果。
【参考文献】
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草精选本(上册).上海:上海科学技术出版社，1998：528，529，563，1041.
HPLC法测定骨质宁搽剂中盐酸小檗碱的含量
