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实验 DNA的粗提取与鉴定
教学目的
1． 初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。 2． 观察提取出来的DNA物质。 实验原理
1． DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0．14mol/L的NaCl
溶液中的溶解度最低，据此可使DNA充分溶解而使杂质沉淀或DNA沉淀而杂质溶解。 2． DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。 3． DNA对蛋白酶、高温和洗涤剂（可以溶解细胞的细胞膜，除去脂质和蛋白质，而对DNA没
有影响）都具有较好的耐性。
??蓝色（用于DNA的鉴定） 4． DNA＋二苯胺??实验材料：
鸡血细胞液（5-10ml），体积分数为95%的酒精溶液（冷却），蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液(抗凝剂)，物质的量浓度分别为2mol/l和0.015mol/l的氯化钠溶液，二苯胺试剂 实验步骤 1．材料制备
0.1g/ml柠檬酸钠100ml 置于500ml烧杯内→玻璃棒搅拌→1000r/min离心2min→吸去上清液→即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀）
活鸡血180ml [思考]为什么要除去血液中的上清液？
2．方法步骤
取血细胞液5-10ml＋20ml蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速
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沸水浴.
搅拌，使血细胞加速破裂，纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质
（1）提取鸡血细胞的细胞核物质
原理：血细胞吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速血细胞
破裂
（2）溶解核内DNA：滤液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌
（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现
丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时NaCl溶液相当于稀释到0．14mol/L）
（4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上
（5）DNA粘稠物再溶解： 在50ml的烧杯中注入20ml 2mol/L的NaCl溶液，缓慢搅拌3 min
使上述粘稠物尽量多的溶解在溶液中。
（6）过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNA
（7）提取含杂质较少的DNA：上述溶液＋冷却的95%的酒精50ml，缓慢搅拌，出现乳白色丝状
物，用玻璃棒将丝装物卷起。
（8）DNA鉴定：
【思考】1.上述过程中两次加入蒸馏水，两次加入的作用一样吗？为什么？
2.用纱布过滤了几次？每次的目的是什么？（你要保留滤液还是纱布上的物质）
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3.有几个步骤中用到了搅拌？每一次的目的是什么？
4. DNA的直径约为2nm，实验中出现的丝状物的粗细是否就表示一个DNA分子直径
的大小？
【实验关键】
本实验成功的关键是获取较多、较纯净的DNA，因此应注意：
1．充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以后，应用玻璃
棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA
2．沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少
存放24小时。
3．正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、（5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要
轻缓，以便获得较完整的DNA分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯溶液中间，用手缓慢转动5-10min。
【补充】
１.也可使用菜花或洋葱做实验材料，只不过实验成功率较低，实验效果与研磨液关系密切。 （1）取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天
（2）取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入10ml研磨液,充分研磨10分钟
（3）将研磨液置于离心管中，在1000r/min的转速下离心2~3分钟，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟
（4）取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。 （5）鉴定（略）
【思考】用菜花代替鸡血作为实验材料，其实验操作步骤完全相同吗？为什么？
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实验 __DNA的粗提取与鉴定
