大鼠ACE2腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

大鼠ACE2腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

方红娟;杨金奎

【期刊名称】《首都医科大学学报》 【年(卷),期】2009(030)004

【摘要】目的 构建携带大鼠血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)基因的重组腺病毒表达载体并确定其对INS-1细胞的感染效率.方法 采用RT-PCR方法,从大鼠肾脏组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,将ACE2基因定向克隆到穿梭质粒载体pShuttle-GFP-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdxsi载体同源重组后得到携带大鼠ACE2基因的重组腺病毒(pAdxsi-GFP-CMV-ACE2),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.体外转染INS-1细胞,绿色荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western blotting检测ACE2蛋白的表达.结果 克隆得到大鼠ACE2基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染INS-1细胞.结论 成功构建了表达ACE2的复制缺陷型重组腺病毒,为深入研究ACE2基因在胰岛细胞中的生物学功能提供了一定的工作基础. 【总页数】6页(449-454)

【关键词】血管紧张素转化酶2;腺病毒载体;INS-1细胞 【作者】方红娟;杨金奎

【作者单位】首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科;首都医科大学附属北京同仁医院内分泌科