第二章 工业菌种选育--基因工程(3)

提取目的基因

??将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。取出DNA

用限制酶切断DNA

目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。返回

提取目的基因的方法（一）

??直接分离基因——鸟枪法将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。用限制酶切成许多片断

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提取目的基因的方法（二）

??人工基因合成法1.逆转录法：以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。2.直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出mRNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。返回

DNA合成仪

PCR扩增仪

目的基因与运载体结合

??用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连拉酶的作用下连接形成重组DNA分子。提取质粒并用限制酶切割用连接酶将目的基因和质粒连接返回

将目的基因导入受体细胞并扩增

??基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植物细胞等。??导入受体细胞常用的方法是将目的基因导入受体细胞借鉴细菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还要对一些受体细胞进行增大通透性的处理(感受态细胞)。??目的基因可以随着受体细胞将受体细胞进行扩增进行快速繁殖，在很短时间内获得大量基因。返回