携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定

携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载

体的构建和鉴定

周炜;冯进波;王旭平;刘春喜;姜虹;王荣;丁士芳

【期刊名称】《实用医学杂志》 【年(卷),期】2009(025)003

【摘要】目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)165基因的重组腺病毒载体.方法:应用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ酶切质粒PDC-VEGF和PDC315,连接DNA目的片段后转化大肠杆菌DH5a构建重组质粒PDC315-VEGF,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体将质粒PDC315-VEGF与质粒pBHGE3共转染293细胞获取重组腺病毒,以重组腺病毒DNA为模板,PCR鉴定构建的重组腺病毒.扩增、浓缩纯化重组腺病毒,微量滴定法测定腺病毒滴度.结果:通过连接反应构建重组质粒PDC315-VEGF,酶切分析和测序证明构建正确.经细胞内同源重组构建携带人VEGF165基因的重组腺病毒,PCR扩增421 bp VEGF165片段,证实VEGF165基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体,腺病毒滴度为5.0×109pfu/mL.结论:通过双质粒细胞同源重组,生产携带人VEGF165基因的重组腺病毒,为动物试验奠定基础. 【总页数】3页(342-344)

【关键词】血管内皮生长因子类;腺病毒载体

【作者】周炜;冯进波;王旭平;刘春喜;姜虹;王荣;丁士芳

【作者单位】250012,济南市,山东大学齐鲁医院放射科;250012,济南市,教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室;250012,济南市,教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室;250012,济南市,教育部和卫生部心血管重构和