人民医院手部微生物学监测标准操作规程
一、适用范围
1．评价医务人员洗手、卫生手消毒、外科手消毒的效果。
2．怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时。 二、监测时机
在接触患者前或进行诊疗活动前采样。 三、采集材料
1．无菌洗脱液A(吐温1 g，蛋白胨10 g，氯化钠8．5 g，蒸馏水1 000 m1)：用于普通洗手、乙醇类速干消毒剂手消毒。
2．无菌洗脱液B(吐温1 g，蛋白胨10 g，氯化钠8．5 g，亚硫酸钠2 g，蒸馏水1000 m1)：用于碘制剂手消毒。 3．无菌洗脱液C(吐温1 g，蛋白胨10 g，氯化钠8．5 g，卵磷脂2 g，蒸馏水1 000 m1)：用于含氯己定手消毒。 4．无菌肉汤增菌液：用于未消毒或洗手时。 四、采集方法
(一)评价洗手、卫生手消毒、外科手消毒的效果 1．被检人洗手或手消毒后，在接触患者前或进行诊疗活动前采样。
2．被检人将双手伸出，五指并拢。
3．检查者取2支无菌棉拭子，并浸沾于含相应中和剂的无菌洗脱液中。
4．取一支棉拭子在一只手手指屈面，从指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面积约30 cm2)，并随之转动采样棉拭子；按同样方法用另一支棉拭子涂擦另一只手。 5．剪去操作者手接触部位，将2支棉拭子投入10 ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。 (二)当怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时 1．模拟现场实际情况，在接触患者前或进行诊疗活动前采样。
2．采集步骤同评价手卫生效果，但洗脱液改为无菌肉汤增菌液。 五、标本检测
(一)带菌量检测(平皿倾注法)
1．将采样管在混匀器上振荡20 s或用力振打80次左
右。
2．用无菌吸管分别吸取1 ml待检样品接种于2个直径为90 mm无菌平皿中。
3．再加人已熔化的45～48℃的营养琼脂15～18 ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固。
4．将平皿置于(36±1)℃温箱培养48 h，计数菌落数。
5．计算公式：
细菌总数(cfu／c㎡)=平板上菌落数×稀释倍数／60(c㎡) (二)细菌种类鉴定
1．将无菌增菌肉汤培养液试管置于(36±1)℃温箱培养24～48 h。
2．若无菌增菌肉汤培养液试管浑浊，应根据实际情况选择血平板、中国蓝平板、双s平板、麦康凯平板或各种商用快速筛选平板进行细菌接种。
3．接种后将平板置于(36±1)℃温箱培养24～48 h，挑取可疑菌落进行微生物学鉴定，必要时做药敏或分子生物学分型。
六、注意事项
1．结果判定：卫生手消毒后细菌总数应≤10 cfu／c㎡；外科手消毒细菌总数应≤5 cfu／c㎡。
2．应根据手卫生所用方法，选择含相应中和剂的无菌洗脱液。
3．倾注时温度必须控制在45～48℃，温度过高可致细菌死亡，过低则影响倾注效果。
4．当怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时，监测目的在于考察实际工作中医务人员手卫生状况，虽然同样在接触患者前或进行诊疗活动前采样，但医务人员不一定进行了手卫生。
5．当怀疑医院感染暴发或流行与手的传播有关时，目标微生物的监测只能定性不能定量。
6．血平板适合大多数细菌和真菌生长；中国蓝平板可筛选革兰氏阴性杆菌；双s平板可筛选沙门菌和志贺菌；麦康凯平板可筛选革兰氏阴性非发酵菌。
人民医院手部微生物学监测标准操作规程
