重庆市血型血清学规范化培训班试验内容
一组
带教教员
杨 民 主管技师 陈 瑛 技师 陈 敏 技师
一. ABO血型正反定型 二. Rh(D)抗原鉴定 三. 交叉配血； 一、ABO血型鉴定
ABO血型系统 正反定型，要求做玻板法与试管法。
1.玻板法： (1)取洁净玻板，用记号笔在正定型一侧注明抗-A、抗-B、抗-A（B）,
反定型一侧孔中注明A细胞、B细胞、O细胞，标记待检者姓名。 (2)在正定型一侧孔中先加入相应试剂血清1滴，再加入待检者20%～30%红细胞
悬液1滴；在反定型一侧先加入待检者血清2滴，再加入相应20%-30%标准红细胞1滴(取3-5人份的混合红细胞洗涤一次配成20%-30%红细胞混悬液) (3)摇动玻板数次5min后观察结果，如有怀疑须做试管法对照。报告方式: 待检
者某某红细胞鉴定血型为×型。
2.试管法：（1）检查前整理检验台、试管架上只放待检者标本，查对标本与化验
单是否相符。（2）取6支试管（10×75mm），写上待检者姓名，3支用于正定型，分别注明抗-A、抗-B、抗-A(B)；3支用于反定型，要求标准悬浮红细胞用生理盐水配成2-4%，（洗涤1次的压集红细胞1滴加盐水1ml）。分别注明A细胞、B细胞和O细胞。（3）正定型试管中分别加入相应血型试剂1滴，再加待检者2-4%红细胞悬液1滴。（4）反定型试管中分别加待检者血清2滴，再加相应的2-4%红细胞悬液1滴。（5）将6支试管以3000rpm离心15s或1000rpm离心1min。（6）取出轻轻摇动，肉眼观察红细胞有无凝集，（7）核对后填写登记本及报告单或输入计算机。
二、 Rh(D)抗原鉴定 要求做玻板法与试管法
1．玻板法：取洁净玻板一块，用记号笔在左侧注明待检姓名，另两孔注明阴性、
阳性对照；将室温盐水反应的抗-D血清各加一滴于上述相应的孔内，1孔加入待检者20-30%红细胞悬液一滴，另两孔分别加Rh(D)阴性、Rh(D)阳性20-30%红细胞悬液1滴；用干净玻棒搅拌红细胞悬液和血型试剂充分混合；连续轻轻倾斜转动玻板，一般在5min内观察结果，或按试剂说明书规定的时间观察结果。
结果判读：先看阴性、阳性结果是否相符，结果相符再看检测孔，结果相符才可出报告。 2．木瓜酶法：
（1）检查前整理检验台、试管架上只放待检者标本，查对标本与化验单是否相
符。待检者红细胞、Rh(D)阳性红细胞、Rh(D)阴性红细胞用生理盐水洗涤1次配成2-4%红细胞混悬液，（洗涤1次的压集红细胞1滴加盐水1ml）; （2）取3支试管（10×75mm），写上待检者姓名，阴性对照，阳性对照，先加
抗-D试剂血清1滴，再分别加入相对应2-4%红细胞混悬液1滴。最后加1%木瓜酶液2滴;
（3）置37℃水浴箱中孵育20分钟;
（4）将3支试管取出以3000rpm离心15s或1000rpm离心1min; （5）取出轻轻摇动，肉眼观察红细胞有无凝集; （6）核对后填写登记本及报告单或输入计算机。
*Rh (D)阴性者,用不同批号抗-D重复做一次，再作间接抗人球蛋白试验,以免遗漏Du型和假阴性。待检者血清做不规则抗体筛查，鉴定抗体特异性。
三、交叉配血试验
1．聚凝胺法交叉配血试验
(1)试剂 ①LIM(低离子溶液)；②Polybrene（聚凝胺）③Resuspending(重悬液) ④
Positive control(阳性对照)；
(2)红细胞用生理盐水配成2-4%红细胞混悬液；
（3）方法：①取试管两支，1支标明主侧受者、供者姓名，加受者血清2滴，
加供者2-4%红细胞悬液1滴，另1支标明次侧，供者、受者姓名，加供者血清2滴，加受者2-4红细胞悬液1滴；②分别加LIM液9滴于试管中，混匀置室温1分钟，再加2滴聚凝胺液，混匀置室温15秒，1000rpm离心1min 弃上清，轻摇试管，肉眼观察有无凝集，无凝集要重复试验； （4）有凝集再加2滴重悬液轻摇试管，肉眼观察有无凝集，如果在30秒钟散
开，为配血相合。若凝集不散开为配血不相合。若有可疑，要用显微镜观察， 必要时重复1遍； （5） 登记配血结果。 2．戴安娜卡式配血系统
（1）取配血卡做好标记，受者与供者；
（2） 取献血者10μl压积红细胞加入1ml生理盐水中，配成1%红细胞混悬液
备用；
（3）将受血者血浆25μl加入戴安娜配血卡中；
（4）再加献血者1%红细胞混悬液50μl，低离子液25μl；
（5）37℃孵育箱，孵育15分钟后，专用离心机离心肉眼观察结果。红细胞网
在上面为阳性，红细胞沉到底部为阴性； （6）登记、打印配血结果。
重庆市血型血清学规范化培训班试验内容
二组 带教教员
张 红 技师
刁荣华 技师 陈寒梅 技师
四、 额外抗体筛查
1．用聚凝胺法
(1) 试剂 ①LIM(低离子溶液)；②Polybrene（聚凝胺）③Resuspending(重悬液) ④
Positive control(阳性对照)；
(2) 红细胞用生理盐水配成2-4%红细胞混悬液；
(3) 方法：①取试管3支，标明待检者姓名，谱细胞1、2、3号，加受者血清2
滴，分别加谱细胞2-4%红细胞悬液1滴，②加LIM液9滴于试管中，混匀置室温1分钟，再加2滴聚凝胺液，混匀置室温15秒，1000rpm离心1min弃上清，取出轻摇试管，肉眼观察有无凝集，无凝集要重复试验； (4) 有凝集再加2滴重悬液轻摇试管，肉眼观察有无凝集，如果在30秒钟散开，为无额外抗体。若凝集不散开为有额外抗体。 有额外抗体，要用谱细胞鉴定抗体特异性。
2．卡式筛查（按交叉配血步骤进行）
重庆市血型血清学规范化培训班试验内容
三组 带教教员
隆晓秋 主管技师 戚 超 技师 许 聃 技师
五. 抗-人球蛋白试验（coombs）
标本要求: 1.直接抗-人IgG试验，抽血1ml于抗凝瓶内摇匀。2.间接抗球蛋白试
验，不抗凝血3ml 参考值:健康人一般不凝集(阴性)。 1.直接抗球蛋白试验
(1) 待检者红细胞用生理盐水洗涤3次，配成2-4%红细胞悬液。
(2) 对照细胞悬液：取抗-D抗体加O型Rh(D)阳性红细胞(2滴血清，1滴红细胞)，
37℃致敏45min-1h，洗涤3次，洗涤后弃尽上清液，配成2-4%红细胞悬液。 (3) 阴性对照取O型红细胞洗涤3次，配成2-4%的备用。取试管3支，分别标明待检者姓名，阴性及阳性对照。
(4) 待检管加待检者2-4%红细胞悬液1滴，阴性对照及阳性对照管各加准备好的
阴、阳性2-4%红细胞悬液1滴。
(5) 然后每管加抗人球蛋白血清1滴，混匀，以3000rpm离心15s或 1000rpm离
心1min，观察结果。先观察阴性、阳性结果是否相符，再看被检管是否凝集，不凝集表示阴性、凝集表示阳性。 (6) 报告方式: 待检者某某直接抗球蛋白试验×性。 2.间接抗球蛋白试验
(1) 试剂红细胞的选择：抗球蛋白间接试验是检查患者血清中有无游离的不完全
抗体，故需选择含相应抗原的红细胞作试剂红细胞，被检血清中含抗-D，所选试剂红细胞若无D抗原则会漏检;
(2) 谱细胞，O型Rh（D）阳性红细胞洗涤后配成2-4%细胞悬液。取试管3支，
分别标明被检者姓名，阴性及阳性对照。待检管加待检者血清3-4滴、5%谱细胞悬液1滴；
(3) 阴性对照加生理盐水2滴，5%试剂红细胞悬液1滴；阳性对照管加抗-D血
清2滴，Rh(D)阳性5%红细胞悬液1滴。试管内反应物混匀，置于37℃水浴45min-1h。(4) 生理盐水洗涤3次，末次洗涤后弃尽上清液控干，加抗球蛋白血清1滴，3000rpm15s离心或 1000rpm离心1min后观察结果。观察结果同直接抗人球蛋白试验。
血型血清学试验带教步骤
