10、靛基质（Imdole）试验
某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。 试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养基管，于36±1C培养24h时后，取约2ml培养液，加入Kovacs氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为阳性，或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。 实验证明靛基质试剂可与17种不的靛基质化合物作用而产生阳性反应，若先用二甲苯或乙醚等进行提取，再加试剂，则只有靛基质或5-甲基靛基质在溶剂中呈现红色，因而结果更为可靠。 11、三糖铁（TSI）琼脂试验
试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。
本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 12、氨基酸脱羧酶的测定
有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行。当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。
接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于37℃培养4天观察。当指示剂呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。 13、硫化氢（H2S）试验
有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。
试验方法：在含有硫代硫酸钠等指示剂的培养基中，沿管壁穿刺接种，于36±1℃培养24~28h，培养基呈黑色为阳性。阴性应继续培养至6天。也可用醋酸铅纸条法：将待试菌接种于一般营养肉汤，再将醋酸铅纸条悬挂于培养基上空，以不会被溅湿为适度；用管塞压住置36±1℃培养1~6天。纸条变黑为阳性。 14、柠檬酸盐或丙酸盐的利用
某些细菌能利用柠檬酸盐或丙酸盐作为碳源，及磷酸胺作为氮源，将柠檬酸分解为二氧化碳，则培养基中由于有游离钠离子存在而呈碱性。
接种与观察结果：取幼龄菌种接种于斜面上，适温培养3－7天，培养基呈碱性（蓝色）者为阳性反应，不变者则为阴性。
15、利用丙二酸盐试验
丙二酸盐是三羧酸循环中琥珀酸脱氢酶的抑制剂。能否利用丙二酸盐，也是细菌鉴定中的一个鉴别性特征。
许多微生物代谢有三羧酸循环，而琥珀酸脱氢是三羧酸循环的一个环节，丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶，与丙二酸不被分解，所以琥珀酸脱氢酶被占据，不能释放出来催化琥珀酸脱氢反应，抑制了三羧酸循环。
接种和观察结果：
用幼龄菌种接种测定培养基和空白培养基，于适温培养1－2d，观察培养基变色情况。
如测定培养基生长并变蓝色，表示可利用丙二酸盐，为阳性结果。反之，如测定培养基未变色，而空白对照培养基生长，则为阴性，即不利用丙二酸盐。 16、葡萄糖酸盐的氧化
假单胞菌属和肠道杆菌科的细菌，可氧化葡萄糖酸为2－酮基葡萄糖酸。葡萄糖酸无还原性基团，氧化后形成酮基，则可将斐林氏试剂的呈蓝色的铜盐还原为砖红色的Cu2O沉淀。
试验方法：用pH7.2的磷酸缓冲液配制成含1％葡萄糖酸盐（可用葡萄糖酸钠或葡萄糖酸钙）的溶液。分装试管，每管2mL。刮取适温培养18－24小时的菌苔至2mL的葡萄糖酸盐溶液中制成浓的菌悬液，置30℃过夜，然后每管加入0.5mL的斐林试剂，放在沸水浴中加热10分钟，试管中液体由蓝色变为黄绿，绿橙色或出现红色沉淀者为阳性反应，如溶液不变色者为阴性。 17、硫化氢-靛基质-动力（SIM）琼脂试验
试验方法：以接种针挑取菌落或纯养物穿刺接种约1/2深度，置36±1℃培养18~24h，观察结果。培养物呈现黑色为硫化氢阳性，混浊或沿穿刺线向外生长为有动力，然后加Kovacs氏试剂数滴于培养表面，静置10min，若试剂呈红色为靛基质阳性。培养基未接种的下部，可作为对照。
本试验用于肠杆菌科细菌初步生化筛选，与三糖铁琼脂等联合使用可显著提高筛选功效。
18、β-半乳糖苷酶（ONPG）的测定
本试验应用于肠肝菌科的鉴定。 测定步骤：
（1） 将测定菌接种于TSI斜面上，培养于37℃18h（或其他最适温度） （2） 挑取1大环菌苔入约0.25mL的生理盐水中制成菌悬液，每管加1滴
甲苯，摇匀（有助于酶的释放），于37℃放置5分钟。
（3） 在菌悬液中加入0.25mL的0.75mol/L ONPG，测定管置于37℃水浴培
养。经30分、1、2、3、……24h进行观察，如有黄色者则为阳性。 19、耐盐性试验
本试验是观察渗透压对细菌生长的影响。由于不同菌类耐盐性不同，故常以此作为鉴别特征。一般可根据不同种类的菌株，选择其适合生长的培养基，在其中加入不同量的NaCl，接种后观察其生长与否，以判断其耐盐性。
以肉汤培养液根据鉴定需要，配成不同浓度的NaCl，如2％、3.5％、5％、7％、10％等。培养基要求十分澄清，接种时应采用幼龄菌液，直针接种，适温培养3－7d，与未接种的对照管对比，目测生长情况。 20、卵磷脂酶的测定
菌体如存在有卵磷脂酶，就能使卵磷脂分解生成脂肪和水溶性的磷酸胆碱。 接种与观察结果：将测试菌的菌液，环接在有卵黄的试管和不加卵黄的对照管中，适温培养1、3或5天观察。假若与对照管相比较，在卵黄胰胨液中或表面，形成白色沉淀者，则为阳性反应，表示卵磷脂被分解，生成脂肪和水溶性的磷酸胆碱，说明有卵磷酶的存在。
另一种方法：
以无菌操作取出卵黄，放入灭菌的三角瓶中，加相当于等量的生理盐水摇匀后，取10mL卵黄液加入到溶化的约50－55℃的200mL肉汁胨琼脂培养基中，混合均匀后倒入培养皿，制成卵黄平板，过夜后即可使用。
接种与观察结果：将测试菌点接在卵黄平板上，每皿可分散点接4－5株菌、（芽孢杆菌以点接1－2株菌为宜）以不影响结果观察为度，如测试厌氧菌，则须在上面加盖无菌的盖玻片。每株菌至少重复点接两皿。适温培养1－2d观察，在菌落周围形成乳白色混浊环，表示卵磷脂被分解，生成脂肪，说明该菌株有卵磷脂酶存在。 21、石蕊牛奶的反应
牛奶中主要含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊在中性时呈淡紫色，酸性时呈粉红色，碱性呈蓝色，还原时则自上而下地褪色变白。
细菌对牛奶的作用有一下几种：
（1） 产酸――细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。
（2） 产碱――细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。
（3） 胨化――细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶变得比较澄清。 （4） 酸凝固――细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变化，当酸度很高时，可使牛
奶凝固。
（5） 凝乳酶凝固――有些细菌能产生凝乳酶，使牛奶中的酪蛋白凝固，此
时石蕊常呈蓝色或不变色。 （6） 还原――细菌生长旺盛，使培养基氧化还原电位降低，因此石蕊还原
褪色。 接种与观察结果：接种待测菌株，适温培养3、5、7d或14d，按上述特征观察和记录牛奶产酸、产碱、凝固或胨化等反应。 22、酪素水解试验（酪蛋白水解）
牛奶平板的制备：取5g脱脂奶粉加入50mL蒸馏水中（或用50mL脱脂牛奶），另称1.5g琼脂溶于50mL蒸馏水中，将两液分开灭菌。待冷至45－50℃时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥，然后将菌种点接在平板上，每皿可点接3－5株菌。适温培养1、3、5天，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。
配制该培养基时，切勿将牛奶和琼脂混合灭菌，以防牛奶凝固。 23、酪氨酸水解
将L－酪氨酸0.5g悬浮于10mL蒸馏水中，8磅20分钟灭菌，然后于100mL无菌的营养肉汤琼脂混合，倾倒平板，待凝固后，将测试菌接种于平皿上，培养7到14d，记录酪氨酸结晶是否被水解而变透明。 24、苯丙氨酸脱氨试验
某些细菌（如变形杆菌）具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸遇到三氯化铁呈蓝绿色。本试验用于肠肝菌科和某些芽孢杆菌属的鉴定。
接种与观察结果：将菌种接种于该培养基斜面上，适温培养3－7d（某些芽孢杆菌须培养21d）。取10％的FeCl3水溶液4－5滴，滴加在生长菌苔的斜面上，当斜面和试剂液面处呈蓝绿色时为阳性反应，表示从苯丙氨酸形成苯丙酮酸。 25、产糊精结晶试验
某些需氧芽孢杆菌能产生淀粉酶，使淀粉水解为糊精。该反应仅用于区别多粘芽孢菌，浸麻芽孢菌和环状芽孢菌的培养物。在大试管中（200X20mm）装碾过的小麦（或燕麦）0.5g，CaCO30.2g，蒸馏水10mL，灭菌后接种，35℃培养3、5和7d后，取1滴卢哥尔氏碘液混匀，干燥后，用显微镜观察有暗褐色或蓝色的六角形结晶的糊精，假若大量形成，则排列为扇形或针状。 26、从甘油产生二羟基丙酮
本试验主要是用于区分醋酸单胞菌属和假单胞菌属以及某些芽孢杆菌的鉴定。生酮反应是由相应的多元醇的脱氢酶的作用，此反应就是测定有否这些脱氢酶。
接种与观察结果：融化三角瓶中的培养基，倒成平板，凝固后在平板上划短线接种，适温培养10天，在平板上倒入斐林试剂A、B混合液，以覆盖菌落为度，2小时内检查，若在菌落周围出现红色的晕者为阳性反应。为了能掌握这一试验，可接种多粘芽孢杆菌作阳性对照。 27、厌氧硝酸盐产气
在厌氧情况下，有些好氧细菌，能以硝酸盐代替分子氧作为受氢体，进行厌氧呼吸，将硝酸盐还原为气态氮，即为土壤中的反硝化作用。某些芽孢杆菌，假单胞菌及产碱菌等属的细菌具有此反应。
接种封油：以斜面菌种用接种环接种后，用凡士林油（凡士林和液体石蜡为1：1）封管，封油的高度约1厘米。必须同时接种不含有硝酸钾的肉汁胨培养液作对照。
观察结果：培养2－7d，观察在含有硝酸钾的培养基中有否生长和产生气泡。如有气泡产生，表示反硝化作用产生氮气，为阳性反应。但如不含硝酸钾的对照培养基也可产生气泡，则只能按可疑或阴性处理。 28、马尿酸盐水解试验
本试验作为区分某些芽孢杆菌的鉴定和黄单胞菌属的鉴定之用。 接种和观察结果：
以幼龄菌种接种于上述培养液中，适温培养4周（高温芽孢菌培养2周），取1mL培养物，和1.5mL50％的；硫酸混合，静置片刻，在酸性混合物中有针状结晶出现为阳性，证明从马尿酸盐形成安息香酸。 29、对叠氮化钠的抗性
本试验用于高温芽孢杆菌的测定。 接种和观察结果：
取1环幼龄的菌液，接种于上述培养基中，同时接种营养肉汤作为对照。45℃培养7至14d观察生长情况。 30、氰化钾试验
氰化钾（KCN）是呼吸链末端抑制剂。能否在含有氰化钾的培养基中生长，是鉴别肠杆菌科各属常用的特征之一。
接种和观察结果：
用幼龄菌种接种于加氰化钾的测定培养基和未加氰化钾的空白培养基中，适温培养1－2d，观察生长情况。
能在测定培养基上生长者，表示氰化钾对测定菌无毒害作用，为阳性。若在测定培养基和空白培养基上均不生长，表示空白培养基的营养成分不适于测定菌
微生物常规鉴定技术（带图片）
