大肠杆菌菌落总数检测
步骤
文档编制序号：[KKIDT-LLE0828-LLETD298-POI08]
大肠杆菌及菌落总数检测方法
为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。
下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。 一、大肠杆菌：
1）培养基准备（以乳糖胆盐发酵琼脂为例） 双料试管配制
A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。 B、用称量天平秤取7g乳糖。
C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。 单料试管配制
A、 用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。 B、 用称量天平秤取乳糖。
C、 将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。
2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。
3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。 4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下： A、 量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后与25g样品混合均匀。（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）
B、 取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。 C、 取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。 D、 用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。
E、 用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。
F、 用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。
G、 用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml吸管取样品液体分别注入双料试管中
H、 用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。
I、 装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。
J、 24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。
二、 菌落总数的测定
1、取平板计数琼脂与100ml灭菌后的蒸馏水混合均匀。 2、分别取15ml平板琼脂液到-1、-2、-3培养皿中，待培养皿液体凝固后将培养皿放入36℃±1℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、取出培养皿，用肉眼计数菌落总数。 实验基本完成。
注一：蒸馏水在高温灭菌121℃情况下进行30min灭菌。
大肠杆菌菌落总数检测步骤
