Bipolaris australiensis HD-1胆红素氧化酶纯化、鉴定
及其酶学性质
黄世臣;赵敏
【期刊名称】《安徽农业科学》 【年(卷),期】2014(000)011
【摘要】[目的]为了获得B.bipolaris HD-1胆红素氧化酶纯品,确定酶的同源性及其常规酶学性质.[方法]将B.bipolaris HD-1发酵液依次通过硫酸铵盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析确定蛋白的纯度、浓度和酶活力;通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)法获得氨基酸序列,并利用Mascot软件在NCBI蛋白库中的比对,以确定同源蛋白来源;用SDS-PAGE方法测其表观分子量;用等电聚焦方法测定等电点;用Linwerver-Burk双倒数作图法测定米氏常数;并对该酶的酶学性质进行了常规的测定.[结果]获得具有胆红素氧化酶酶活性的电泳纯单体蛋白,酶活为46 000 U/L,比活为1.15 U/mg;MALDI-TOF共获得135个氨基酸,该蛋白与来源于Hel-minthosporium tritici-vulgaris的漆酶前体蛋白序列同源性达100％;蛋白的表观分子量为68 kDa;pI为4.1;它对ABTS和胆红素的米氏常数分别为Km(ABTS) =1.8×10-5 mol/L(pH 3.0)和Km(bilirnbin)=2.7×10-5 mol/L(pH 7.5);对胆红素的最适催化活性为36℃,酶在-40℃下可保持2年,酶活保持在90％以上,在pH 8 ～9.5下可保持相当高的催化胆红素活性,能够耐受高浓度的硝酸钠和尿素,低浓度的叠氮化钠对酶活有促进作用而高浓度则抑制,对氯化钠、溶解氧敏感.[结论]该蛋白具有典型的胆红素氧化酶特性,又存在明显的不同. 【总页数】4页(3228-3231)
【关键词】胆红素氧化酶;Bipolaris australiensis;蛋白纯化;鉴定;酶学性质 【作者】黄世臣;赵敏
【作者单位】东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040;延边大学农学院,吉林延吉133002;东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150040 【正文语种】中文 【中图分类】S182 【相关文献】
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Bipolaris australiensis HD-1胆红素氧化酶纯化、鉴定及其酶学性质
