HPLC法测定头痛宁胶囊中柴胡皂苷a含量
崔春利1，王 梅2，郭东艳1，唐志书1，谢 伟3（1.陕西中医学院，咸阳 712046；2.陕西中医学院附属医院，咸阳 712000；3.陕西步长制药有限公司，西安712000）
【摘 要】摘要：目的 建立HPLC法测定头痛宁胶囊中柴胡皂苷a的含量。方法 色谱柱为依利特C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈－水，梯度洗脱；检测波长为210nm，体积流量1.0mL·min－1；柱温室温；进样量为10μL。结果 柴胡皂苷a在0.43～4.3μg范围内线性关系良好，相关系数为0.999 9，平均回收率为97.5%，RSD为1.2%。结论 该方法快速简便，准确灵敏，可作为头痛宁胶囊质量控制的含量分析方法之一。 【期刊名称】西北药学杂志 【年(卷),期】2013(028)001 【总页数】3
【关键词】头痛宁胶囊；高效液相色谱；柴胡皂苷a
头痛宁胶囊由柴胡、川芎、蔓荆子、香附、白芍等药味组成，具有祛风清热、通络止痛之功效，临床用于治疗偏头痛、血管神经性头痛以及风寒、风热、痰浊、瘀血所致的急慢性头痛等症［1］。方中柴胡疏散退热、疏肝解郁，为方中主药之一。现代研究表明，柴胡根主含皂苷、挥发油、植物甾醇及多糖类化合物，具有抗炎、保肝、解热、镇痛等作用［2］。其中柴胡皂苷a为其主要化学和生物活性成分，与柴胡临床疗效一致。以往研究组对头痛宁胶囊中白芍的指标性成分芍药苷进行过质量评价［3］，结果重复性良好。为了进一步充实该制剂质量评价，本研究参考文献［4－7］采用HPLC法对本制剂中柴胡皂苷a进
行含量测定，取得了满意的结果。本法操作简便，重复性好，测定结果准确可靠，可用于本制剂的质量控制。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2695泵，Waters 2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站（美国 Waters公司）；GB－204电子天平（瑞士梅特勒－托利多公司），BT25s（十万分之一）电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；KDE高功率数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
1.2 试药 柴胡皂苷a对照品（中国药品生物制品检定所，批号110777－200507）；头痛宁胶囊（陕西中医学院附属医院制剂中心提供，批号20110617，20110619，20110621，规格为0.35g／粒）；乙腈为色谱纯；水为双蒸水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱：依利特Hypersil C18（250mm×4.6mm，5μm）；检测波长：210nm；柱温：室温；流速：1.0mL·min－1；流动相：乙腈－水（梯度洗脱），见表1。
在此条件下，理论板数分别以柴胡皂苷a峰计算为5 187，头痛宁胶囊样品中柴胡皂苷a与相邻杂质峰均达到基线分离，缺柴胡的空白制剂样品在柴胡皂苷a峰处均无吸收，不干扰本品的测定。见图1。 2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 取柴胡皂苷a对照品各适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含柴胡皂苷a 0.215mg对照品溶液，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下本品内容物，研细，取细粉约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入含50mL·L－1浓氨试液的甲醇溶液25 mL，密塞，浸泡30min，超声处理（功率400W，频率40kHz）30min，放置过夜，滤过，用50mL·L－1浓氨试液的甲醇10mL洗涤容器及药渣，洗液与滤液合并，回收溶剂至干，残渣加水15mL使溶解，置分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取4次，每次15mL，合并正丁醇层，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次30 mL，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 标准曲线及线性范围 精密吸取柴胡皂苷a对照品溶液（质量浓度为0.215mg·mL－1）2，4，8，12，16和20μL，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积。以峰面积A为纵坐标，柴胡皂苷a质量m（μg）为横坐标绘制标准曲线，回归方程为A＝314 701m＋19 589，r＝0.999 9。结果表明，柴胡皂苷a在0.43～4.3μg范围内线性关系良好。
2.4 精密度实验 取20110617批制剂样品供试品溶液，并依据上述色谱条件，精密吸取该样品溶液10μL，重复进样5次，记录峰面积，结果RSD为1.45%，表明本方法精密度良好。
2.5 重复性实验 取20110617批制剂样品6份，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并依据上述色谱条件，精密吸取各样品溶液10μL，进样，记录峰面积，结果含量分别为：0.065 4，0.065 9，0.065 0，0.065 9，0.061 0和0.065 7mg／粒，平均含量为0.064 9mg／粒，结果RSD为2.95%，表明本方法重复性良好。
2.6 稳定性实验 取20110617批制剂样品，按供试品溶液制备方法制备样品溶
HPLC法测定头痛宁胶囊中柴胡皂苷a含量
