小淋巴细胞)与单核细胞。在正常情况下,其构成得比例、形态与质量基本就是不变得，但在病理情况下,这种比例、形态、质量将会发生变化,故临床上常把计数白细胞总数与分类计数结合起来,进行分析与诊断某些感染性疾病得种类。
【原理】白细胞分类计数就是将血液制成分布均匀得薄膜涂片，用复合染料染色,根据各类白细胞着色特征，在显微镜下观察其数量、形态与质量得变化、予以分类计数并求出各种白细胞所占得百分率，对疾病有辅助诊断意义。 【器材与试剂】
器材:载玻片、染色缸及支架、洗瓶、显微镜及镜油、白细胞分类计数器、吸水纸等。 试剂：染液、缓冲液
1、瑞（Ｗｒigｈt)氏染液 瑞氏染粉０、lg，甲醇60、0ｍｌ。将染粉置于研钵中,加少量甲醇研磨，使其溶解，然后将已溶解得染液倒入洁净得棕色玻瓶,剩下未溶解得染料再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直至全部染料溶解并用完甲醇为止。在室温中保存７日后即可应用。新配制得染液偏碱性,放置后可呈酸性.保存时间愈久，染色力愈佳。
2、吉（Giemsａ)氏染液 吉氏染粉0.5ｇ,纯甘油3３、0ml,纯甲醇33。0m1。先将染粉置于研钵中，加入少量甘油，充分研磨,然后加入其余量得甘油,水浴加温（60℃)1-2h,经常用玻璃棒搅拌，使染色粉溶解,最后加入甲醇混合,装棕色瓶中保存１周后过滤即成原液。临用时取此原液1ml,加ｐH6.８得缓冲液或新鲜蒸馏水1０ml,即成应用液。
３、瑞—吉氏复合染色液 瑞氏染粉1。０g,吉氏染粉０．3g，中性甘油１0mｌ，甲醇５0０ml。先将瑞氏染粉与吉氏染粉置于研钵中,加入少量甘油与甲醇,充分研磨，吸出上层染液置棕色瓶中，在加甲醇继续研磨，再吸出上液,如此连续数次，直至５00ml甲醇用完。配好后每天早、晚各振摇3 min,共5天,存放１周后可使用。
4、缓冲液(pH6、8) 磷酸氢二钠（Na２HＰO４）３。８g,磷酸二氢钾（KH2ＰO4)５。4７g,用蒸馏水溶解并定容到１00０ ｍl。 【血片涂抹】
1、取洁净载玻片数张，选择边缘光滑得载片作为推片（也可用血细胞计数板得盖玻片做为推片)，用左手得拇指及中指夹持载片并置于平稳得台面上,右手持推片。
２、取被检血(经EDＴＡ抗凝）1小滴，放于载玻片得右端,手持推片放于血滴之前并与载片接触,以３0°～40°角向后拉动推片,使之与血滴接触,待血液扩散形成一条线状之后,以均等得速度轻轻向前推动推片,则血液就被均匀地涂于载片上而形成一薄血膜。良好得血片，血液应分布均匀，厚度要适当，对光观察时呈霓红色,血膜应位于玻片中央，两端留有空隙,以便标上患畜名称、畜别、编号、日期。常温下自然风干(冬天可适当加温)。 【血片染色】有单染与复染
１、瑞氏染色法 就是最常用得染色法之一。将干燥得血片用蜡笔于血膜之两端各划一道横线，以防染色液外溢.置血片于水平支架上,滴瑞氏染液于血片上,并计其滴数，直至将血膜浸盖为止,待染１~2 mｉｎ后,滴加等量缓冲液或新鲜蒸馏水,轻轻吹动使之混匀,再染4～１0 miｎ,用蒸馏水或常水冲洗，吸干，油镜观察。此染液对胞浆及颗粒得染色效果较好。 2、姬姆萨氏染色法 血涂片用甲醇固定1~2 ｍiｎ。待甲醇挥发后再将血片直立于装有姬姆萨氏应用液得染色缸中，染色30~60 mｉｎ,取出用蒸馏水或常水冲洗,干燥后镜检.此染液对细胞核及血液原虫得染色效果较好。 3、瑞氏与姬姆萨氏复合染色法将血片置于染色架上,滴加复合染液3~５滴,使其迅速布满血膜,约１ ｍin后,滴加缓冲液5～１０滴,轻轻摇动玻片使之充分混合，５～10 ｍｉn后用流水冲去染液,待干镜检. 【分类计数】 1、先用低倍镜检视血片上白细胞得分布情况,一般就是粒细胞、单核细胞及体积较大得细胞
分布在血片得上、下缘及尾端,淋巴细胞多在血片得起始端。滴加显微镜油,转过油镜头进行分类计数。
２、计数时，为避免重复与遗漏，可用四区、三区或中央曲折计数法推移血片，记录每一区得各种白细胞数。每张血片最少计数１00个白细胞，连续观察2~3张血片,求出各种白细胞得百分比。
3、记录时，可用“白细胞分类计数器”,也可事先设计一表格，用画“正”字得方法记录,以便于统计百分数。
【正常参考值】见表1－1
表１—1各种动物白细胞分类正常平均值(％) 动物种类 嗜碱性白细胞 牛 马 羊 猪 骆驼 ０、５ 0、５ 0、5 0、5 0、５ 嗜酸性白细胞 4、0 4、5 ４、5 ２、５ 8、0 ０、5 0、５ 1、0 １、0 1、0 嗜中性白细胞 晚幼细胞 杆状核 分叶核 ３、0 4、0 3、０ 5、５ ６、5 33、0 33、0 47、0 57、0 55、5 35、０ 2、0 2、5 3、５ 3、5 2、0 5４、0 34、0 ３2、0 55、0 淋巴细胞 单核细胞 【临床意义】
白细胞分类计数可发现各种白细胞得量或质得变化，结合白细胞总数,可进一步揭示机体防御机能得状况，对疾病得诊断、病程、预后判断及治疗等有着重要得指导意义。
由于外周血液中白细胞得组成主要为中性粒细胞与淋巴细胞,尤其就是中性粒细胞数最多,约占白细胞总数得5０％～7０%(除牛、猪外）,所以,在多数情况下,白细胞数得变化主要受中性粒细胞得影响，其增多或减少得临床意义与中性粒细胞变化得临床意义基本一致. 1、嗜中性白细胞增加:
(1)生理性得：多见于运动或进食后、妊娠或分娩、新生畜以及应激等。
(2)病理性得:多见于炎症性疾病，如某些急性传染病、化脓性疾病、急性炎症及某些慢性炎证等.此时因组织需要大量得嗜中性白细胞,故骨髓在一定范围内会大量释放嗜中性白细胞进入外周血液。
2、嗜中性白细胞减少，主见于某些病毒感染性疾病,如、犬瘟热、传染性肝炎、猫传染性泛白细胞减少等,某些慢性中毒性疾病如汞制剂中毒、牛蕨类植物中毒、磺胺或重金属类中毒,过敏反应性休克,弓形虫病,辐射线得照射,再障性贫血，病畜极度衰竭及濒死期等
3、嗜酸性粒细胞:增多时主要见于寄生虫病、过敏性疾病；减少时见于高水平得皮质类固醇激素及病情严重时。
４、嗜碱性粒细胞:变化比较少见,临床意义不大。
5、淋巴细胞：淋巴细胞增多见于肾上腺素引起得生理性增多、一些慢性传染病如牛结核与马鼻疽以及感染性疾病得恢复期；淋巴细胞减少见于皮质类固醇激素诱发得减少、急性全身性感染初期及射线损伤。
6、单核细胞:单核细胞增多见于急性传染病得恢复期及血孢子虫病、霉菌感染;单核细胞减少见于急性败血症及病危期。
【各种白细胞得形态特征】见表１—２
家畜各种白细胞得形态特征主要表现在细胞核得特有形状、位置与染色特点以及细胞浆得颜色、有无颗粒与颗粒得着色特点上，并应注意细胞得大小及形状.
表1—２各种白细胞得形态特点(瑞氏染色法） 白细胞 细胞核 细胞浆 分类 嗜中性幼稚型 大小、形状 中等大小,圆或椭圆 位置 偏心 形状 椭圆或肾形 颜色 红紫 核染色质 细,疏松 核膜 多少 颜色 颗粒 红或蓝，粒细或粗 红或蓝或紫 不清楚 中等 蓝或粉红 嗜中性杆状核 中等大小，圆或椭圆 中心或偏心 中心或偏心 马蹄形 浅紫蓝色 细致 腊肠形 S形 ３～５深蓝紫色 粗糙 叶居多 2～3叶居多 较淡紫蓝 粗糙 存在 多 粉红 嗜中性分叶核 中等大小,圆或椭圆 存在 多 浅粉红 粉红或紫红 嗜酸性白细胞 嗜碱性白细胞 较大,圆中心或或椭圆 偏心 中心 或椭圆 存在 存在 多 多 少 蓝或粉红 浅粉红 天蓝、深蓝或淡粉红,核周有淡染色带 深红、分布匀,马得最大 蓝黑色，分布不匀，多在边 无或有少数嗜天青颗粒 较大,圆叶状核较淡紫蓝 粗糙 不清楚 圆或微凹入 深紫蓝 淋巴细胞 大、中、偏心 小,圆或椭圆 极大, 偏心或呈多中心 边、多角形 致密,大浓密 或中等块 单核细胞 豆形、淡紫蓝色 疏松、网山形、状，边缘折叠状不齐 或椭圆 存在 很多 灰蓝或天蓝色 很多，非常细小,淡紫色
白细胞分类计数
