A．构建重组DNA时，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体
B．构建重组DNA时，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体
C．图乙中的P1噬菌体载体只用EcoRⅠ切割后，含有两个游离的磷酸基团
D．用EcoRⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA
解析：选D。用Bgl Ⅱ和Sau3A Ⅰ切割目的基因和P1噬菌体载体会形成相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，A正确；由于Sau3AⅠ的切割位点在EcoRⅠ的两个酶切位点之间，因此，用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因和P1噬菌体载体会形成相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，B正确；P1噬菌体载体为环状DNA，其上只含有一个EcoRⅠ的酶切位点，因此用EcoRⅠ切割后，该环状DNA分子变为双链DNA分子，因每条链各含有一个游离的磷酸基团，故切割后含有两个游离的磷酸基团，C正确；由图甲可知，用EcoRⅠ切割目的基因所在片段和P1噬菌体后形成的黏性末端相同，可任意连接，不止产生一种重组DNA，D错误。
9．某线性DNA分子含有3 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列有关说法正确的是( )
a酶切割产物(bp) b酶再次切割产物(bp) 1 600；1 100；300 800；300
A．在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列分别有3个和2个 B．a酶与b酶切出的黏性末端不能相互连接 C．a酶与b酶切断的化学键不同
D．用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，—AGATCC—
序列会明显增多
—TCTAGG—
解析：选D。根据以上分析可知在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列都是2个，A错误；图中显示两个酶的识别序列不同，但是切割后露出的黏性末端相同，a酶与b酶切出的黏性末端可以相互连接，B错误；a酶与b酶切断的化学键都是磷酸二酯键，C错误；—AGATCC—
a酶和b酶切割后形成的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下可连接形成。
—TCTAGG—所以用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，所—AGATCC—
得DNA分子中序列会明显增多，D正确。
—TCTAGG—
10．(2019·广州高二模拟)下图为某种质粒的简图，小箭头所指分别为限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，P为转录的启动部位。已知目的基因的两端有EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。下列叙述正确的是( )
A．将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，在DNA连接酶的作用下，由两个DNA片段之间连接形成的产物有两种
B．DNA连接酶的作用是将酶切后得到的黏性末端连接起来，形成一个重组质粒时形成两个磷酸二酯键
C．为了防止目的基因反向粘连和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoRⅠ和
BamHⅠ
D．能在含青霉素的培养基中生长的受体细胞表明该目的基因已成功导入该细胞 解析：选C。如果将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoRⅠ酶切，那么酶切后二者的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下，由两个DNA片段之间连接形成的产物有三种，只有一种符合基因工程的需求；DNA连接酶的作用是将酶切后的目的基因和质粒的黏性末端连接起来形成重组质粒，该过程形成4个磷酸二酯键；为了防止目的基因和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoRⅠ和BamHⅠ，这样切割后得到的DNA片段两侧的黏性末端不同；由于受体细胞为无任何抗药性的原核细胞，因此能在含青霉素的培养基中生长，可能是受体细胞成功导入了目的基因，也可能是只导入了不含目的基因的载体。
二、非选择题
11．下图表示两种限制酶识别DNA分子的特定序列，并在特定位点对DNA分子进行切割的示意图，请回答以下问题：
(1)图中甲和乙代表______________________________________________________。 (2)EcoRⅠ、HpaⅠ代表__________________________________________________。 (3)图中甲和乙经过相应操作均形成两个片段，切口的类型分别为________________、________________。甲中限制酶的切点是________________之间，乙中限制酶的切点是________之间。
(4)由图解可以看出，限制酶的作用特点是___________________________________ ______________________________________________________________________。 (5)如果甲中G碱基发生基因突变，可能发生的情况是
_____________________________________________________________________。 解析：(1)由图示看出，甲和乙代表由脱氧核苷酸构成的不同的DNA片段。(2)EcoRⅠ和HpaⅠ能切割DNA分子，说明它们是限制酶。(3)甲中切点在G、A之间，切口在识别序列中轴线两侧，形成黏性末端；乙中切点在A、T之间，切口在识别序列中轴线处，形成平末端。(4)(5)限制酶能识别DNA分子的特定核苷酸序列，并从特定位点切割DNA分子。当特定核苷酸序列变化后，就不能被相应限制酶识别。
答案：(1)有特定脱氧核苷酸序列的DNA片段 (2)两种不同的限制酶
(3)黏性末端 平末端 G、A A、T
(4)能识别双链DNA分子的特定脱氧核苷酸序列，并从特定的位点将DNA分子切开 (5)限制酶不能识别切割位点
12．根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。 (2)质粒载体用限制酶X(识别的序列由6个核苷酸组成)切割后产生的片段如下：
AATTC……G
G……CTTAA
该酶识别的序列为__________________，切割的部位是__________________。 (3)为使切割后的载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用限制酶X切割外，还可用限制酶Y切割，两种酶共同的特点是________________________________________。
(4)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶，其中后者只能连接一种末端。
(5)基因工程中除质粒外，____________和________也可作为载体。
解析：(1)限制酶切割DNA分子后可产生两种类型的末端，即平末端和黏性末端。(2)将图中片段两端的黏性末端对接后可以看出限制酶X识别的序列为6个核苷酸组成的—GAATTC—，互补链是—CTTAAG—，切割的位点为G和A之间的磷酸二酯键。(3)质粒载体可以用限制酶X切割，也可以用另一种限制酶切割，说明该酶与限制酶X切割产生的黏性末端相同或者是互补。(4)基因工程使用的DNA连接酶，按来源可分为E·coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶，其中只能连接黏性末端的是E·coli DNA连接酶。(5)基因工程的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒。
答案：(1)黏性末端 平末端
(2)—GAATTC—或—CTTAAG— G和A之间的磷酸二酯键 (3)两种限制酶切割后形成的黏性末端相同或互补 (4)T4 E·coli
(5)λ噬菌体的衍生物 动植物病毒
13．下图所示，质粒pZHZ9上含有X抗生素抗性基因(XR)和Y抗生素抗性基因(YR)。其中，XR内部含有限制酶KasⅠ识别序列，YR内部含有限制酶FseⅠ、HpaⅡ、NaeⅠ、
Ngo MIV识别序列，五种酶的识别序列如图B(表示切割位点)，且这些识别序列在整个质
粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列。请回答下列有关遗传信息传递与表达的问题：
人教版选修3 1.1 DNA重组技术的基本工具 作业
