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第一章 免疫细胞化学基本概念及发展简史
一．免疫细胞化学的基本概念
免疫细胞化学（ immunocytochemistry）是利用特异性抗原抗体反应，观察和研究组织细胞特定抗原（或抗体）的定位和定量的技术。
应用免疫细胞化学技术可以在光镜和电镜水平观察细胞膜及细胞内某种抗原物质的存在。从而为生物医学研究生命大分子，特别是那些对细胞化学方法来说尚无作用物或作用物特异性不强的酶、蛋白质、激素及受体蛋白等在组织内分布、细胞内定位以及代谢状态等，提供了特异性强、灵敏度高而又直观化的原位分析细胞组成物质的细胞化学手段。
二．免疫细胞化学的发展简史 1941年， Coons等创立了荧光抗体法 1959年， Singer创立了铁蛋白法 1966年， Nakane等创立了免疫酶技术 1971年， Faulk和Taylor 创立了免疫胶体金法 1976年， Bayer等提出了亲合组织化学法 第二章 免疫细胞化学相关的组织学和细胞学技术
一． 取材
（一） 组织标本的取材
1. 活检钳的刃口锋利，以免组织受挤压。
2. 取所需组织：主要病变区、病灶与正常组织交界区。必要时取远
离病变区的正常组织作为对照。
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3. 为充分保存组织的抗原性, 取材要快，尽量保持组织新鲜。 （二） 细胞标本的取材 1．
印片法
应用：活检标本、手术切除的标本。
方法：新鲜标本以最大面剖开暴露病区，载玻片轻压病区，脱落
细胞黏附于载玻片上，立即浸入固定液中5－10分钟，取出自然干燥，低温保存。 优点：简便省时，细胞抗原保存较好。 缺点：细胞分布不均重叠，影响标记效果。 2．
穿刺吸取涂片法
应用：实质器官的病变区。
方法： ①穿刺液较少时直接涂片，力求均匀。
②穿刺液较多时，穿刺液滴入1－2毫升Hanks液（RPMI 1640液）内，轻搅，500rpm离心5－10分钟，弃上清，制成细胞悬液（2x106细胞/ml）,吸一滴于载玻片上，轻涂，干后固定。 优点：细胞均匀。 缺点：细胞易变形。
3．
体液沉淀涂片法
①细胞数多，取一滴直接涂片。
②细胞数少，取5毫升自然沉淀液以1500rpm离心10分钟，弃上清，将沉淀涂片，略干后固定备用。
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4． 培养细胞
①贴壁生长的细胞：将盖玻片插入培养液中。 ②悬浮生长的细胞：可用离心涂片法制成涂片。
5． 离心涂片机法
细胞悬液2?105~6， 1000r/min， 2min，50~100?l。 注意事项：
①防止脱片, 涂黏附剂，。
②为节省试剂及便于镜下观察和计数，将细胞集中到直径0.6-1.0cm圆圈内，细胞总数以105为宜。
③粘液丰富的标本如胃液、痰液等未经特殊处理，不宜作免疫组化。
二．固定
（一）免疫组化的固定法
选择最佳固定的标准
最好的保存细胞和组织的形态结构。 最大限度的保存抗原的免疫活性。 固定有：
（1）物理固定：血膜空气快速干燥，冻结干燥。 （2）化学固定：
固定方法
1. 浸润法（ immersion method） 4－24小时。 2. 灌流法 ( irrigation method )
免疫组化教程
