实验一 微生物培养基得制备与灭菌(８课时）
一、目得要求
1、学习配制微生物培养基得一般方法与步骤。 2、掌握高压蒸汽灭菌得原理与操作方法。 二、基本原理
正确掌握培养基得配制方法就是从事微生物学实验工作得重要基础。由于微生物种类及代谢类型得多样性，因而用于培养微生物得培养基得种类也很多，它们得配方及配制方法虽各有差异,但一般培养基得配制程序却大致相同,例如器皿得准备，培养基得配制与分装,棉塞得制作，培养基得灭菌,斜面与平板得制作以及培养基得无菌检查等基本环节大致相同. 三、实验材料
1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、１ｍｏl/Ｌ得NaＯH与１moｌ/L HCl溶液。
２、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿与玻璃棒等.
３、其她物品:药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳与注射器等。 四、操作步骤 (一）玻璃器皿得洗涤
玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净,然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。
（二）牛肉膏蛋白胨培养基得配制 1、培养基配制
（１)称量：按培养基配方计算出各成分得用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中.
注意:称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。称药品用得药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。
（2）溶解:用量筒称量所需体积得水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，倒入烧杯中,用玻璃棒搅动溶解即可。
(3）调ｐH：一般用pＨ试纸测定培养基得pH，可用1mｏl/Ｌ NａOH或1mol/L HＣl溶液进行调节。调节ｐH时,应逐滴加入NaOH或HＣI溶液,防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分.边加边搅拌,并不时用PH试纸测试,直至达到所需ｐH为止。
注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子得浓度。 2、制备液体培养基
（1)用量筒准确量取2０mｌ培养基，倒入100ｍl三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
注意:倒溶液时不要把瓶口沾湿。包扎时不要把瓶子弄倒而把棉塞弄湿。 3、制备固体培养基 （1)平板培养基
Ａ、用量筒准确量取100ml培养基，倒入２５0ml三角瓶中，加入２g琼脂粉,塞好棉塞,用报纸包好瓶口并用棉线包扎好,灭菌. Ｂ、将洗净烘干得培养皿用报纸包扎好，灭菌。
C、在超净工作台中,将装在三角瓶中已灭菌得琼脂培养基冷至５０℃左右倾入无菌培养皿中.温度过高时,皿盖上得冷凝水太多；温度低于50℃,培养基易于凝固而无法制作平板。平板得制作应在火旁进行,左手拿培养皿，右手拿三角瓶得底部,左手同时用小指与手掌将棉塞打开,灼烧瓶口,用左手大拇指将培养皿盖打开，倾入1０—1５ml培养基,迅速盖好皿盖,置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中,冷凝后即成平板。 (2)斜面培养基
Ａ、用量筒量取１０0mｌ培养基,倒入一个烧杯中，加入２g琼脂粉，置于石棉网上加热，用玻璃棒搅动溶解至琼脂粉溶解。
B、将洗净烘干得试管放置在试管架上，用注射器将融化琼脂粉得培养基倒入试管至试管高度得1／4处。
注意:不要将试管口弄脏。
C、待培养基冷却凝固后，塞上棉塞,以2支或4支为一组,用报纸将试管口包扎好,灭菌。
D、灭菌后,趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，便斜面得长度不超
过试管总长得1/２。
１０。无菌检查 将灭菌得培养基放入３7℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁得橱内,备用。 (三)培养基得灭菌
培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定得灭菌条件进行进行高压蒸汽灭菌。
（四)培养基得灭菌检查
灭菌后得培养基，一般需进行无菌检查。最好取出1－2管（瓶）,置于37℃温箱中培养1—２天，确定无菌后方可使用。 五、实验内容
1、根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行烘干与包扎。 2、根据要求配制微生物培养基.
3、掌握用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌.
4、掌握液体培养基、平板培养基与斜面培养基得制备。 六、实验报告
１、记录本实验配制培养基得名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。
2、记录所做培养基得无菌检查结果. 七、实验思考题
１、为什么微生物实验室所用得三角瓶口或试管口都要塞上棉塞才能使用？能否用木塞或棉皮塞代替?
2、配制培养基时为什么要调节pH?
３、高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短?
4、高压蒸汽灭菌得原理就是什么？就是否只要压力表上得指针指到所需得压力时就能达到所需灭菌温度？为什么?
５、培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌得培养基如何进行无菌检查?
6、请设计实验对饮料进行无菌检查。
附录 高压蒸汽灭菌技术
一、目得要求
实验一 微生物培养基的制备与灭菌
