H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的原核表达及抗原性分析

H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的原核表达及抗原性分析

张敦伟1，熊永忠2，远立国1，贾 坤1，张桂红1*，李守军1*

【摘 要】为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白，本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因，将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导，SDS-PAGE电泳分析，表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的HA1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明，表达的重组HA1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。 【期刊名称】中国预防兽医学报 【年(卷),期】2011(033)002 【总页数】3

【关键词】犬流感病毒；HA1基因；原核表达；抗原性

犬流感(Canine influenza，CI)是由CI病毒(CIV)引起的以犬体温升高、咳嗽、流涕、喷嚏等呼吸困难为特征的呼吸道传染病，犬发病后易混合、继发感染其他病毒性和细菌性疾病。2006年本实验室在我国华南地区分离到了CIV，序列比对结果显示与韩国2007年分离的H3N2亚型CIV相似性较高，亲缘关系较近[1]，即为禽源性的流感病毒。这预示犬将成为流感病毒的一种新的宿主，经进一步的动物实验证实，幼龄和纯种犬对H3N2 CIV易感，临床症状明显；成年和当地土种犬不易感染或呈隐性感染，并且普遍呈现低死亡率的特点。 CIV属于正粘病毒科流感病毒属，病毒基因组为分节段单股负链RNA，编码至少10种病毒蛋白，其中血凝素(HA)糖蛋白，有亚型特异性，是该病毒最重要的表面抗原，不仅具有诱生中和抗体的能力，而且可刺激机体产生细胞毒性T