基础生物学实验讲义
（生命科学类本科生使用）
广西大学行健文理学院
实验一 普通光学显微镜的使用与生物绘图
一、实验目的
1. 了解普通光学显微镜的基本构造，能规范和较熟练地使用； 2. 学习细胞临时装片的制作方法和生物绘图的方法。
二、实验材料
细菌涂片
三、实验用具
显微镜、载玻片、盖玻片、胶头滴管
四、实验内容
1、普通光学显微镜的基本构造、使用方法及保护 显微镜的基本结构
显微镜构造很复杂，种类很多，但基本结构是由机械和光学两大部分构成，现分述如下： 机械部分它是为光学部分服务的部件，包括以下六部分：
(1) 镜座：显微镜最下面呈马蹄形或圆形的部分，起稳定和支持显微镜作用。 (2) 镜柱：直立于镜座上的短柱，支持显微镜的其它部分。
(3) 镜臂：弯曲成马蹄形的部分，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。
(4) 载物台：自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。台上有一移动器（老式的左右各有一个压片夹），用以固定和移动标本。
(5) 镜筒：和镜臂上方连接的园筒部分。有的显微镜镜筒内有一抽管，可适当抽长，一般长度是160-170mm。镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器（或叫物镜旋转盘），其上装有2-4 个物镜。
(6) 调焦器（调节器或调节螺旋）：为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下 移动，调节焦距。大的叫粗调焦器，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细调焦器，升
降镜筒较慢。
光学部分由接目镜、接物镜、反光镜、聚光器等四部件组成。
(1) 接目镜：装于镜筒上方，由两组透镜构成，接目镜的作用是把接物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。接目镜上刻有5×，8×，10×，15×，25×等符号，表示放大倍数。我们所观察到的标本的物像，其放大倍数是接物镜和接目镜放大倍数的乘积。如接物镜是10×，接目镜是8×，其物像的放大倍数是10×8＝80 倍。可在接目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发，做为指针，用以指示要观察的材料。
(2) 接物镜：装在镜筒下端物镜转换器的孔中，一般的显微镜有 2-4 个接物镜镜头，每个镜头都是由一系列的复式透镜组成的，其上也有放大倍数记号，有4×，10×，40×及100×。4×及10×接物镜是低倍镜，40×是高倍镜，100×是油镜。低倍镜常用于搜索观察对象及观察标本全貌，高倍镜则用于观察标本某部分或较细微的结构，油镜则常用于观察微生物或动植物更细微的结构。
(3) 聚光器（集光器）：位于载物台（通光孔）下方，由两块或数块镜组成，它能将反光镜反射来的光线集中以射入接物镜和接目镜，有的聚光器可升降，便于调光，集光器下有一可伸缩的园形光圈，叫虹彩光圈，可调集光器口径的大小和照射面，以调节光线强弱（有的显微镜只有遮光极而无集光器）。光线过强时，可缩小虹彩光圈。
(4) 反光镜：是显微镜观察时获得光源的装置，位于显微镜镜座中央，一面为平面镜，一面为凹面镜。转动反光镜，可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时，光线强用平面镜，光线弱用凹面镜。
显微镜的使用方法
(1) 取好光源（调光）
用显微镜观察标本前，先要取好光源。首先把显微镜放在自己左肩一侧台前，镜座距桌边约两寸，镜臂朝自己，镜筒朝外。用手转动物镜转换器，使低倍接物镜和镜筒成一直线，正对通光孔。用左眼从接目镜向下注视，同时用手拨动反光镜，让镜面对着光源，当看到圆形镜界（视野）呈现光亮而均匀的时候即调好光了，如视野阴暗不明，则需再调节反光镜和集光器，直到视野明亮均匀为止。若为自带电源，则在使用前打开电源开关，逐步调节光亮度旋钮，直至亮度合适为止。 (2) 观察
将要观察的玻片标本放在载物台通光孔的中央，玻片标本两端用压片夹夹紧，再用手沿顺时
针方向旋转粗调节器，把镜筒徐徐降到物镜头差不多接近玻片标本（约半厘米）为止（从侧面观察下降镜筒）。然后左眼观察，边观察边用调节器将镜筒徐徐上升（逆时针方向旋转粗调节器）直到发现物象，观察清晰为止。如果观察部分不在视野中心，可移动玻片标本到视野中心，再上下转动粗调节器至物象清晰为止。
如果要观察视野内某部分更细微的结构，则需要用高倍镜观察，首先要把观察的部分移至视野中心，然后移动物镜转换器换上高倍镜（使正对通光孔）（使用镜头转化器，不要直接
扳动镜头），再用粗调节器徐徐将镜筒距离调整，至视野中出现物象，然后用细调节器调节
到看清物象止。如光线太弱，可放大虹彩光圈的口径或调节光亮度旋钮。
高倍镜下观察的标本，如果放大倍数还不够，可用油镜，换用前，同样要先在高倍镜下观察，把要观察的部分放在视野的正中央。观察到清晰的物象之后，在盖玻片上表面的中央滴一小滴香柏油，再换上油镜头，使油镜头与香柏油接触，然后由目镜观察。一边观察，一边用手稍移动细调节器（切忌用粗调节器）以看清物象。用油镜观察完毕后，转开油镜，必须用擦镜纸点二甲苯擦去镜头上的香柏油。下降镜筒，直立反光镜，使光学部件的光线不再对在一条直线上。
应当了解的是，在显微镜中观察到的物象是倒象，因此移动玻片时，应注意移动方向。如果要使物象左移动就要向右移动玻片，同样要使物象向前移动，就要向后移动玻片。观察结束后，降下载物台，取掉载玻片，光源调至最弱后关闭电源（为防止下次打开电源时因电流
过大烧毁照明灯泡，请在关闭电源前一定将光源亮度调至最暗）。
显微镜的保养
(1) 取送显微镜时，必须右手握住镜臂，左手托住镜座，轻拿轻放。
(2) 显微镜的使用，一定要按实验指导写的方法和步骤，认真仔细去做，不然，容易损坏标本和镜头，又达不到看清物象的目的。
(3) 观察标本时，一定要先用低倍镜观察，再用高倍镜，低倍镜能看清，就不必用高倍镜。 (4) 不能用硬纸擦透镜，必须用干净的擦镜纸或细软纱布，朝一个方向擦试透镜，以免损坏镜头。
(5) 不要随便转动粗细调节器，以免机器损伤，调节失灵。
(6) 载物台要保持清洁、干净，不要让水或其他液体（酸、碱或其他化学药品等）流到台上，以免生锈或腐蚀。
(7) 避免阳光直接照射，要防潮湿、防灰尘，经常保持镜体和镜体箱的干燥和清洁。
2．细菌涂片形态、结构的观察
将标本片置于镜台上，先练习低倍镜的使用，然后再换高倍镜和油镜观察，绘出各细菌形态图。
生物绘图的要求
(1) 具有高度的科学性，不得有科学性错误。形态结构要准确，比例要正确，要求真实感，立体感，精美而美观。
(2) 图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。 (3) 绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。 (4) 绘图的线条要光滑、匀称，点点要大小一致。
(5) 绘图要完善，字体用正楷，大小要均匀，不能潦草。注图线用直尺画出，间隔要均匀，且一般多向右边引出，图注部分接近时可用折线，但注图线之间不能交叉，图注要尽量排列整齐。
(6) 绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、时间，在图的下方注明图名及 放大倍数。
生物绘图的方法
生物绘图的方法有多种，最常见的是点点衬阴法和线条衬阴法。点点衬阴法即将图形画出后，用铅笔点出圆点，以表示明暗和深浅，给予立体感。在暗处点要密，明处要疏，但要求点要均匀，点点要从明处点起，一行行交互着点，物体上的斑纹描出再点点衬阴。线条衬阴法又称涂抹阴影法，是依靠线条的疏密来表示阴暗和深浅。点点衬阴法要求不能用涂抹阴影的方法以代替点点。 生物绘图的步骤
(1) 绘图前认真的观察标本，搞清实物标本的结构特点，切忌抄书或平空想象。 (2) 用 HB 铅笔轻轻将图轮廓画出，作为草图要掌握好比例和位置。
(3) 在草图的基础上绘详图，此时要用 2H 和3H 铅笔，线条要流畅，点要匀称，点线不要 重复描绘。
(4) 按注图要求绘图，写上图名及班级、姓名、放大倍数等。
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