课题3血红蛋白的提取和分离
一、 学习目标:
本课题尝试对血液屮血红蛋白的提取和分离,使学生能够体验从复杂体系屮提取生物大 分子的基本过程和方法,并了解色谱法,电泳法等分离生物大分子的基本原理,为今后学习 运用这些技术打下基础。
二、 重点:
凝胶色谱法的原理和方法
三、 难点:
样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【基础梳理】 一、 凝胶色谱法
1、 _______________________ 概念:也称做 ________________ ;是根据 分离蛋白质的有效方
法。
2、 原理
(1) _________ 由 ______________________________________ 构成的凝胶,内部有许多贯穿的的 o (2) _____________________ 当 ____________________________________________ 不同的蛋白质通
过凝胶时,相对分子质量 ___ 的蛋白质容易
进入凝胶内部的通道,路程 ________ ,移动速度 __________ ,而相对分子质量 ________ 的蛋白质 无法进入凝胶内部的通道,只能在 ____________ 移动,路程 ________ ,移动速度 ________ ,从而 使 _____________ 不同的蛋白质分子得以分离。 二、 缓冲溶液
1、 _________________________________ 作用:在一定范围内,抵制 ____________________ 的
对溶液pH的影响,维持pH _________ o
2、 ______________ 配制:由 _________________ 种缓冲剂溶解于 _______________________ 中
配制而成,通过调节缓冲剂的 ___________________ 就 可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 三、 电泳
1、 __________________ 概念:指 ____________________ 在电厂的作用下发生 的过程。 2、 _______________________ 原理:在一定的 _____ 下, 、 等生物大分子的可解离基团会带上
______ 或 _______ ,在 _________ 的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷 __________ 的 电极移动。
3、 _______________________________________________ 作用:电泳利用了待分离样吊屮各种分
子 的差异及分子本身的 _____________________________ 、_
______ 的不同,使带电分子产生不同的 __________ ,从而实现样品中 ___________ 的分离。 4、方法:常用的电泳方法有 ________ 和 _________ 。测定蛋白质分子量时逋常使用 ________ o
四、实验操作
1、 ____________________ 样品处理:通过 ______ 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。
⑴红细胞的洗涤:目的是 _____________ o分离时采取 _______________ ,直至上清液中没 有 ________ ,表明红细胞已洗涤干净。
(2)血红蛋.白的释放:在 _______ 和 ________ 的作用下,红细胞破裂,释放出血红蛋白。
⑶分离血红蛋白溶液:把 ____________ 离心后,将试管中的液体用 _________ 过滤、除去—
______ ,于 _______ 中静置片刻后,分离出下层的 __________
2、 粗分离:即透析
c
⑴方法:将血红蛋白溶液装入 _________ ,将 __________ 放入一定量适宜浓度的 ________ 中, 透析 ______
o
(2) 目的:将 _________ 的杂质除去。
(3) 原理:透析袋能使小分子自由进出,而将大分子物质保留在袋内。 3、 纯化:通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下: (1) 凝胶色谱柱的制作。 (2) 凝胶色谱柱的装填
① 材料:本实验使用的是 ____________________ o
② 方法:凝胶用 ______ 充分溶胀后。配成 ___________ ,-次性 ____________ 倒人色谱柱内。 不能有 _______ 存在;不能发生 __________ 流干露出凝胶颗粒的现象。
(3) 样品的加入和洗脱
① a、准备:加样前,打开流出口,使柱内凝胶面上的 __________ 缓慢下降到与 _________ 平 齐,关闭出口。
b、 _________________ 加样:用 _________________________________ 小心地将lmL透析后的
样品加到 ________________ 的顶端,注意不要破 坏 _________________
0
c、 __________________________________________________ 加样后:打开下端出口,使样品渗
入 内。
② 洗脱:加入 ________ ,打开下端岀口,进行 _____________
0
4、 _____________________________________________________________________________ 纯度鉴定:在鉴定的方法中,使用最多的是 ________________________________________________ o
五、操作提示
1、红细胞的洗涤: ________ 、 __________ 与 ______ 十分重要。 __________ 过少,无法除
去血浆蛋白; _______ 过高和 ________ 过长会使 __________ 等一同沉淀,达不到分离效果。
生物:53《血红蛋白的提取和分离》学案(2)(新人教版选修1).docx
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