课题3血红蛋白的提取和分离
一、 学习目标：
本课题尝试对血液屮血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系屮提取生物大 分子的基本过程和方法，并了解色谱法，电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习 运用这些技术打下基础。
二、 重点：
凝胶色谱法的原理和方法
三、 难点：
样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【基础梳理】 一、 凝胶色谱法
1、 _______________________ 概念：也称做 ________________ ；是根据 分离蛋白质的有效方
法。
2、 原理
（1） _________ 由 ______________________________________ 构成的凝胶，内部有许多贯穿的的 o （2） _____________________ 当 ____________________________________________ 不同的蛋白质通
过凝胶时，相对分子质量 ___ 的蛋白质容易
进入凝胶内部的通道，路程 ________ ,移动速度 __________ ，而相对分子质量 ________ 的蛋白质 无法进入凝胶内部的通道，只能在 ____________ 移动，路程 ________ ,移动速度 ________ ，从而 使 _____________ 不同的蛋白质分子得以分离。 二、 缓冲溶液
1、 _________________________________ 作用：在一定范围内，抵制 ____________________ 的
对溶液pH的影响，维持pH _________ o
2、 ______________ 配制：由 _________________ 种缓冲剂溶解于 _______________________ 中
配制而成，通过调节缓冲剂的 ___________________ 就 可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 三、 电泳
1、 __________________ 概念：指 ____________________ 在电厂的作用下发生 的过程。 2、 _______________________ 原理：在一定的 _____ 下， 、 等生物大分子的可解离基团会带上
______ 或 _______ ，在 _________ 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 __________ 的 电极移动。
3、 _______________________________________________ 作用：电泳利用了待分离样吊屮各种分
子 的差异及分子本身的 _____________________________ 、_
______ 的不同，使带电分子产生不同的 __________ ,从而实现样品中 ___________ 的分离。 4、方法：常用的电泳方法有 ________ 和 _________ 。测定蛋白质分子量时逋常使用 ________ o
四、实验操作
1、 ____________________ 样品处理:通过 ______ 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。
⑴红细胞的洗涤：目的是 _____________ o分离时采取 _______________ ，直至上清液中没 有 ________ ，表明红细胞已洗涤干净。
(2)血红蛋.白的释放：在 _______ 和 ________ 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
⑶分离血红蛋白溶液：把 ____________ 离心后，将试管中的液体用 _________ 过滤、除去—
______ ，于 _______ 中静置片刻后，分离出下层的 __________
2、 粗分离：即透析
c
⑴方法：将血红蛋白溶液装入 _________ ,将 __________ 放入一定量适宜浓度的 ________ 中, 透析 ______
o
(2) 目的：将 _________ 的杂质除去。
(3) 原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。 3、 纯化:通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下： (1) 凝胶色谱柱的制作。 (2) 凝胶色谱柱的装填
① 材料：本实验使用的是 ____________________ o
② 方法：凝胶用 ______ 充分溶胀后。配成 ___________ ,-次性 ____________ 倒人色谱柱内。 不能有 _______ 存在；不能发生 __________ 流干露出凝胶颗粒的现象。
(3) 样品的加入和洗脱
① a、准备：加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的 __________ 缓慢下降到与 _________ 平 齐，关闭出口。
b、 _________________ 加样：用 _________________________________ 小心地将lmL透析后的
样品加到 ________________ 的顶端，注意不要破 坏 _________________
0
c、 __________________________________________________ 加样后：打开下端出口，使样品渗
入 内。
② 洗脱：加入 ________ ,打开下端岀口，进行 _____________
0
4、 _____________________________________________________________________________ 纯度鉴定：在鉴定的方法中，使用最多的是 ________________________________________________ o
五、操作提示
1、红细胞的洗涤： ________ 、 __________ 与 ______ 十分重要。 __________ 过少，无法除
去血浆蛋白； _______ 过高和 ________ 过长会使 __________ 等一同沉淀，达不到分离效果。
生物：53《血红蛋白的提取和分离》学案(2)(新人教版选修1).docx
