圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台朱玉贤《现代分子生物学》第4版【教材精讲＋考研真题解析】第6章分子生物学研究法（下）——基因功能研究技术[视频讲解]6.1本章要点详解本章要点■基因表达研究技术■基因敲除技术■蛋白质及RNA相互作用技术■基因芯片技术■利用酵母鉴定靶基因功能■其他分子生物学技术重难点导学1/27圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台一、基因表达研究技术1．基因表达系列分析技术（1）定义基因表达系列分析技术（SAGE）是一种以DNA序列测定为基础定量分析全基因组表达模式的技术，能够直接读出任何一种细胞类型或组织的基因表达信息。（2）原理在转录组水平上，任何长度超过9～10个碱基的核苷酸片段都可能代表一种特异性的转录产物。因此，用特定限制性核酸内切酶分离转录产物中具有基因特异性的9～10个碱基的核苷酸序列并制成标签。将这些序列标签连接、克隆、测序后，根据其占总标签数的比例即可分析其对应编码基因的表达频率。（3）过程（图6-1）2/27圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台图6-12．RNA的选择性剪接技术基因表达系列分析技术3/27圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台（1）RNA的选择性剪接的定义RNA的选择性剪接是指用不同的剪接方式从一个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构体的过程。（2）RNA的选择性剪接的类型（图6-2）图6-2（3）RNA的选择性剪接的意义RNA的选择性剪接由于选择性剪切与细胞生理、发育调节以及肿瘤的发生、转移等有密切关系，阐明基因的选择性剪切机制是了解动植物个体发育和基因功能的重要环节。（4）RT-PCR检测基因的选择性剪切4/27圣才电子书www.100xuexi.com十万种考研考证电子书、题库视频学习平台以cDNA两端特异引物或来自不同外显子的引物序列在不同组织来源的RNA样品中进行扩增，观察PCR产物大小是否存在差异。如果发现差异，测序后可看出这种差异是否来自于选择性剪接。3．原位杂交技术（1）定义原位杂交（ISH）是指用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织、细胞、间期核及染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。（2）类型①RNA原位杂交用放射性或非放射性（如地高辛、生物素等）标记的特异性探针与被固定的组织切片反应，用放射性标记或酶促免疫反应显色进行检测。②染色体原位杂交染色体原位杂交是指用放射性或非放射性（如地高辛、生物素等）标记的特异性探针与细胞中的染色体上特异的DNA序列结合，通过检测放射性标记或经酶促免疫显色，确定该DNA在染色体上的位置的原位杂交技术。③荧光原位杂交荧光原位杂交即FISH技术。a．步骤第一，对寡核苷酸探针做特殊的修饰和标记；第二，用原位杂交法与靶染色体或DNA上特定的序列结合；第三，通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体来确定该DNA序列在染色体上的位置。b．优点5/27
朱玉贤《现代分子生物学》第4版【教材精讲+考研真题解析】(分子生物学研究法(下)——基因功能研究技术
