链霉菌来源谷氨酰胺合成酶GLnA_Shy的性质表征

链霉菌来源谷氨酰胺合成酶GLnA_Shy的性质表征

刘辉; 刘璋敏; 冯雁; 李谦; 崔莉

【期刊名称】《南京工程学院学报（自然科学版）》 【年(卷),期】2020(042)002

【摘要】在大肠杆菌BL21(DE3)中对吸水链霉菌5008的GLny_Shy基因进行克隆表达.GLnA_Shy蛋白由469个氨基酸组成,其分子量约为5.2×104.体外酶学性质及酶动力学测定结果显示,GLnA_Shy酶催化反应的最适温度为35℃,最适pH为7.5,对底物谷氨酸的米氏常数(Km)和催化常数(kcat)分别为(21.8±3.2)μmol/L和(3.8±0.5)×10-3 s-1.进化树分析和同源建模结果显示GLnA_Shy蛋白属于谷氨酰胺合成酶(GS)家族,该酶包含一个较小的N端结构域(残基区域为16～94)和一个较大的C端结构域(残基区域为101～466),其三级结构具有GS典型的双通道结构,与底物谷氨酸的结合位点为Glu131、Ser264、Arg320和Arg359.谷氨酰胺合成酶在含氮化合物的生产上应用广泛,通过解析GLnA_Shy的功能,为进一步对其进行定点改造提供了理论基础. 【总页数】8页(249-256)

【关键词】谷氨酰胺合成酶; 大肠杆菌; 同源建模; 链霉菌; 克隆表达 【作者】刘辉; 刘璋敏; 冯雁; 李谦; 崔莉

【作者单位】上海交通大学 生命科学技术学院 微生物代谢国家重点实验室 上海 200240; 中国药科大学 生命科学与技术学院 江苏 南京 210009 【正文语种】中文 【中图分类】Q814 【相关文献】