白色念珠菌 黑曲霉 试验人/日期： 复核人/日期：
常规倾注平皿法测定需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数方法验证小结
按照验证方案的要求进行试验，若各试验菌株的回收率在0.5～2范围内，则可确认常规倾注平皿法适用于本品的需氧菌总数、霉菌与酵母菌总数检查。如常规倾注平皿法适用于霉菌与酵母菌总数检查，但不适用于需氧菌总数检查，则下面进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的需氧菌总数检查。
7.4. 需氧菌总数检查—离心沉淀-薄膜过滤法 7.4.1.供试液的制备
取供试品10g，加0.9%无菌氯化钠溶液至100ml，振摇，制成1：10的供
试液贮备液。取1:10的供试液贮备液50ml，经500转/分钟离心3分钟，取上清液得供试液。 7.4.2.试验组
取供试液1 ml，加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，混匀，全量通过薄膜（孔径0.45μm混合纤维素膜）后，以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜2次（100ml/次），然后在第3次冲洗液（100ml0.9%无菌氯化钠溶液）中加入7.2项下制备的50～100cfu的试验菌，过滤。每株试验菌株平行制备2张滤膜。取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上，30～35℃倒置培养3天（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌），或培养5天（白色念珠菌、
黑曲霉），点计菌落数。 7.4.3.供试品对照组
取供试液1 ml，加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，混匀，全量通过薄膜（孔径0.45μm混合纤维素膜）后，以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次（100ml/次），平行制备2张滤膜。取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上，30～35℃倒置培养5天，点计菌落数。 7.4.4.菌液对照组
取0.9%无菌氯化钠溶液300 ml，200ml通过薄膜（孔径0.45μm混合纤维素膜）后，在余下的100ml0.9%无菌氯化钠溶液中加入7.2项下制备的50～100cfu的试验菌，过滤。每株试验菌株平行制备2张滤膜。取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上，30～35℃倒置培养3天（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌），或培养5天（白色念珠菌、黑曲霉），点计菌落数。 稀释剂对照组
依照7.2项下菌液制备方法，以0.9%无菌氯化钠为稀释液，将各菌液稀释至含菌50～100cfu/ml，然后以500转/分钟离心3分钟，取上层菌液作下面的试验。
取上层菌液1 ml，加至100 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，混匀，全量通过薄膜（孔径0.45μm混合纤维素膜）后，以0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次（100ml/次），每株试验菌株平行制备2张滤膜。取出滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平皿上，30～35℃倒置培养3天（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌），或培养5天（白色念珠菌、黑曲霉），点计菌落数。
7.4.6. 离心沉淀-薄膜过滤法测定需氧菌总数方法验证的接受标准
试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值(即试验菌的回收率)应在0 .5?2 范围内，同时稀释剂对照组与菌液对照组菌落数的比值应也在0 .5?2 范围内。
7.4.7.离心沉淀-薄膜过滤法测定需氧菌总数方法验证的结果 试验次数1：
人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ；胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号： 培养箱 型号 编号 ；培养温度： ；培养时长：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天
菌试验组 试验菌种株 代1 2 数 金黄色 葡萄球菌 铜绿假 单胞菌 枯草芽 孢杆菌 白色念 值 均1 1 2 值 均1 2 值 回收率 供试品对照组 菌液对照组 组 均各菌株对照组稀释剂对照试验组 稀释剂回收率 各菌株珠菌 黑曲霉 试验人/日期： 复核人/日期：
试验次数2：
人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ；胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号： 培养箱 型号 编号 ；培养温度： ；培养时长：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天
菌试验组 试验菌种株 代1 2 数 金黄色 葡萄球菌 铜绿假 单胞菌 枯草芽 孢杆菌 白色念 珠菌 值 均1 1 2 值 均1 2 值 回收率 供试品对照组 菌液对照组 组 均各菌株对照组稀释剂对照试验组 稀释剂回收率 各菌株黑曲霉 试验人/日期： 复核人/日期：
试验次数3：
人工牛黄甲硝唑胶囊批号: ；胰酪大豆胨琼脂培养基配制批号： 培养箱 型号 编号 ；培养温度： ；培养时长：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌3天，白色念珠菌、黑曲霉5天
菌试验组 试验菌种株 代1 2 数 金黄色 葡萄球菌 铜绿假 单胞菌 枯草芽 孢杆菌 白色念 珠菌 黑曲霉 值 均1 1 2 值 均1 2 值 回收率 供试品对照组 菌液对照组 组 均各菌株对照组稀释剂对照试验组 稀释剂回收率 各菌株试验人/日期： 复核人/日
版中国药典微生物限度检查方法验证方案
