电化学发光免疫检测原理

电化学发光免疫检测原理

电化学发光免疫测定的基本原理 (Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)

是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA,RNA探针检测。

2+其检测原理(以TSH检测为例):第一步:结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)] + N3羟基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。

第二步:将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素

的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。

2+下一步，蠕动泵将形成的 [Ru(bpy)],抗体,抗原,抗体,磁珠复合体吸入流动测量室，此3

时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的TSH抗体(与生物素结合的和2+与[Ru(bpy)]结合的抗体)也被吸出测量室。 3

紧接着，蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。发光2+剂 [Ru(bpy)]和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的32++?[Ru(bpy)]被氧化成三价，后者是一种强氧化剂;另一方面，TPA 被氧化成阳离子自由基TPA，3+?后者很不稳定，可自发失去一个质子(H)，形成自由基TPA，这是一种很强的还原剂，可将3+2+一个电子给三价的[Ru(bpy)]，使其形成激发态的[Ru(bpy)]，而TPA自身被氧化成二丙胺332+和丙醛。激发态的[Ru(bpy)]通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成32+基态的[Ru(bpy)]。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光32+强度，光强度与[Ru(bpy)]的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。 3

最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。

IMMULITE ?

美国德普(DPC)公司开发成功的IMMULITE ?型酶放大化学发光自动化分析仪及其配套的各项检测试剂盒是在IMMULITE系统条件下发展完善的.它以聚苯乙烯塑料珠为固相载体, 碱性磷酸酶(APase)标记抗体(或抗原),并作用于发光底物AMPPD[3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″磷酰氧基)苯基-1,2二氧乙烷].

专利清洗技术

IMMULITE技术的核心是测试杯。它可以自动进行彻底的包被珠清洗。测试杯是生化反应容器，其中有一个特异性抗体包被珠。高速旋转测试杯可以将杯中的液体彻底甩入测试杯的外腔。测试杯可以进行多次持续数秒钟的高速离心清洗，从而使游离标记物有效地分离出来。DPC独特地离心清洗技术稳定地实现了极低的非特异性结合。这是提高检测性能的关键。

图1 图2 图3 图4