2007 - 2008 学年第 一 学期本科试卷
课程名称:工业微生物学实验(A） ―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线―――――――――――――― 胞，而青霉没有。 （√） 7．利用细菌总数测定方法所测得的是一群在营养琼脂生长的需氧或兼性厌氧的杂菌总数。 （×） 8．酵母死亡率测定实验中使用的无毒的染料为溴甲酚紫。 （×） 9．简单染色或革兰氏染色中在载玻片上所涂的菌量越多越便于观察。 （×） 10．培养基的pH值在加热灭菌后会下降0.3~0.4，因此配制时的pH值要比要求的略高一些。 （√） 得分 1．大肠菌群 学 院: 专 业: 学号: 姓名: 三、名词解释（共12 分，每小题3分） 大肠菌群系指一群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 2．显微镜分辨力 是指显微镜分辨被检物体细微结构的能力，也就是判别两个物体点之间最短距离 的本领，分辨力用R表示。 3．无菌操作 培养基经灭菌后，用经过灭菌的接种工具在无菌条件下接种含菌材料于培养基上，这一操作称为无菌操作。 4．假菌丝 酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。 得分 四、简答题（共30分） 1．革兰氏染色的原理？（5分） 第 7 页 （共 15 页）
年级：05级 专业：生物技术（本科） 课程号：04210207
革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构的不同（1分）。革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质，而肽聚糖的含量较少。当用乙醇或丙酮脱色时，类脂质被溶解，增加了细胞壁的通透性，使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细胞被脱色，经复染后，又染上复染剂的颜色（2分）。而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多且交联度度大，类脂质含量少，经乙醇或丙酮洗脱后，肽聚糖的孔径变小，通透性降低，因此细胞仍保留初染时的颜色（2分）。
2． 酵母菌死亡率测定的原理是什么？（5分）
活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原值低，且还原能力强（1分）。当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色（2分）。在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌和死菌（2分）。
3. 简单描述利用血球计数板测定酵母浓度的步骤及注意事项。（6分） ①检查血球计数板：先用显微镜检查血球计数板看其是否沾有杂质或菌体 ②稀释样品：稀释后的样品以每小格内含有4~5个酵母细胞为宜
③加样：先将盖玻片放在计数室上面，用吸管吸取一滴已稀释好的菌液滴于盖玻片边缘，待酵母细胞全部沉降到计数室底部再进行计数。
④计数：先在低倍镜下找计数室，然后转换高倍镜计数，每个样品要重复计数三次，取平均值
⑤计算：酵母细胞数/mL=（100小格内酵母菌细胞总数/100）×400×10×1000×稀释倍数
⑥清洗：计数板使用完毕后，用蒸馏水冲洗，绝不能用硬物洗刷。
第 8 页 （共 8 页）
―――― ― ― ― ― ― :名―姓― ― ― ― 线 ― ― ― ― ―:号―学― ― ― ― ― ― 订 ― ― ― ― ― :业―― 专― ― ― ― ― 装 ― ― ― ― ― :院― ―学――――― ―2007 - 2008 学年第 一 学期本科试卷
课程名称:工业微生物学实验(A） （每步1分） 4. 简述细菌生理生化实验中石蕊牛乳实验中细菌对牛奶作用的情况。 （6分） 细菌对牛奶的作用有以下几种情况： ⑴ 产酸：细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。 ⑵ 产碱：细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。 ⑶ 胨化：细菌产生蛋白酶，使酪蛋白分解，故牛奶变得比较澄清。 ⑷ 酸凝固：细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红，当酸度很高时，可使牛奶凝固。 ⑸ 凝乳酶凝固：有些细菌能产生凝乳酶使牛奶中的酪蛋白凝固，此时石蕊呈蓝色或不变色。 ⑹ 还原：细菌生长旺盛时，使培养基氧化还原电位降低，因而石蕊褪色。 （每步1分） 5．测定细菌菌落总数的食品卫生学意义是什么？（4分） 测定细菌总数的目的是为了检测食品的新鲜程度和被粪便污染的程度（2分）；另外，也可以通过观察细菌在食品中或某种培养基中的繁殖动态（如繁殖速度），为对被检样品进行卫生学评价提供依据（2分）。 6. 简述青霉和曲霉小室培养的操作过程。（4分） 曲霉和青霉的小室培养接种：取一培养皿，内放一层吸润20%甘油（可以用水代替）的滤纸，放U形玻棒。（1分）取一干燥无菌的载玻片和盖玻片，于载玻片的一边滴加融化的PDA（或察氏培养基），点种孢子，并将盖玻片盖与其上，要求中央的培养基直径不大于0.5cm，盖、载玻片间距离不高于0.1mm。（2分）然后将制好的载片放入培养皿中的玻棒上，盖好皿盖，30℃正置培养。可以在培养不同时间直接置干燥系物镜下观察（1分）。
第 7 页 （共 15 页）
年级：05级 专业：生物技术（本科） 课程号：04210207
得分
一家饮料厂新开发了一种新型果味饮料，以玻璃瓶包装，产品出厂前需要你设计一个实验来检测包装后的饮料成品中大肠菌群数是否超标。写出你的设计程序及每一步操作的目的和注意事项。 1.检验程序 （8分）
五、实验设计题（共18 分） 被检样品 ↓ 用生理盐水进行无菌稀释 ↓
接种乳糖胆盐发酵管，36±1℃培养24±2h 不产气 产气 ↓ ↓ 大肠菌群阴性 伊红美蓝琼脂平板，36±1℃培养18~24h ↓ ↓ ↓ ↓ 报告 革兰氏染色 乳糖发酵管，36±1℃培养18~24h
革兰氏阳性 革兰氏阴性，无芽孢杆菌 产气 不产气 ↓ 大肠菌群阴性 大肠菌群阳性 大肠菌群阴性 ↓ ↓ 报告 报告 报告
2.检样稀释 （2分）
(1) 以无菌操作将检样25ml（25g）放入盛有225ml无菌生理水的三角瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠）内，经充分振荡作成1:10的均匀稀释液。用1ml无菌吸管吸取1:10稀释液1ml，注入含有9ml无菌生理盐水的试管内，振摇试管
第 8 页 （共 8 页）
―――― ― ― ― ― ― :名―姓― ― ― ― 线 ― ― ― ― ―:号―学― ― ― ― ― ― 订 ― ― ― ― ― :业―― 专― ― ― ― ― 装 ― ― ― ― ― :院― ―学――――― ―2007 - 2008 学年第 一 学期本科试卷
课程名称:工业微生物学实验(A） 使管内溶液混均，作成1:100的稀释液。另取1ml无菌吸管，按上项操作依次作10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml无菌吸管。根据食品卫生标准要求或对被检样品污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种乳糖胆盐发酵管3支。 3.乳糖胆盐发酵（2分） 将被检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃培养箱内，培养24±2h，如果所有糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，继续进行检验。 4.分离培养 （2分） 将产气的发酵管的菌液分别划线接种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃培养箱内，培养18～24h，观察菌落形态，并作革兰氏染色和复发酵证实试验。 5.复发酵证实试验 （2分） 在伊红美蓝琼脂平板上挑取：①紫红色、具有金属光泽的菌落；②深红色、不带或略带金属光泽的菌落；③淡红色、中心着色较深的菌落。具有以上特征的菌落为可疑菌落，挑取1～2个进行革兰氏染色，同时对应接种到乳糖发酵管内进行复发酵，置36±1℃培养箱培养24±2h，观察产气情况。凡在乳糖发酵管内产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即报告为大肠菌群为阳性。 6.报告 （2分） 根据复发酵证实试验得到大肠菌群阳性管的管数，查MPN检索表，报告每100ml（或100g）检样中大肠菌群的最可能数。 第 7 页 （共 15 页）
工业微生物学实验试题(附解析)-生物工程-生物技术-制药工程-天津科技大学-01解析
