99Tcm-octreotide体外受体结合法及其结合特性研究

99Tcm-octreotide体外受体结合法及其结合特性研究

武鸿文;管昌田

【期刊名称】《中华核医学与分子影像杂志》 【年(卷),期】2001(021)001

【摘要】@@直接标记法制备99Tcm-octreotide 已获得成功［1］，但标记过程的化学处理有可能影响受体结合特性，因此，笔者进行了体外细胞膜放射受体分析研究，以便为临床受体显像提供实验依据。rn 一、材料与方法rn 1.膜受体结合方法学研究。99Tcm-octreotide纯化后放化纯为93.8%，放射性比活度649 TBq/mol［1］，采用Wistar大鼠脑皮质细胞膜进行体外受体结合分析，其制备方法参照文献［2］，有改进。细胞膜蛋白质质量浓度为0.32 g/L。按照体外放射受体分析的一般流程，首先进行最大结合活性测定，取定量99Tcm-octreotide 5×10-7 mol/L，细胞膜量逐级增加，直到过量，进行结合反应，以滤膜放射性总结合TB（放射性计数）与加入rn99 Tcm-octreotide量T（放射性计数）的比值得最大结合率，即为99Tcm-octreotide的最大结合活性。其次以最大结合率为标准，分别改变反应体系中温度、保温时间、细胞膜和标记肽用量、分离条件等相关因素，按照受体分析流程进行分离和测定，以确定细胞膜受体结合反应的最佳条件。最后通过观察同一细胞膜在同一次结合实验中的变异系数CV1（n=5组）和同一细胞膜在不同天进行结合实验的变异系数CV2（n=5次），研究最佳结合反应条件的可重复性。非特异性结合（NSB）包括细胞膜组织本身的NSB(采用竞争抑制曲线法)和实验材料（滤膜、试管等）的NSB。rn 2.受体结合特性研究。①饱和实验：TB组测定，在系列试管中依次加入细胞膜60 μL，标记肽(1～10)×10-7 mol/L，级差1×10-7

mol/L。NSB组测定，在系列试管中除上述试剂外，每管还须加入octreotide 2 μg，使细胞膜受体特异性结合受到充分抑制。两组试管均用含0.5% BSA Tris缓冲液补足至200 μL，25 ℃保温90 min，快速通过滤膜终止结合反应，测滤膜放射性即为TB或NSB，最后求得亲和常数KD和受体最大结合容量Bmax。②竞争抑制实验：在系列试管中依次加入细胞膜60 μL，标记肽5×10-7 mol/L， 非标记肽量10-12～10-5mol/L，级差10-1 mol/L，在相同反应条件下结合并终止反应。③对照物99Tcm-oxytocin体外结合实验：参照上述方法进行。 【总页数】1页(25) 【关键词】

【作者】武鸿文;管昌田

【作者单位】华西医科大学第一附属医院核医学科;华西医科大学第一附属医院核医学科

【正文语种】中文 【中图分类】R81 【文献来源】

https://www.zhangqiaokeyan.com/academic-journal-cn_chinese-journal-nuclear-medicine-molecular-imaging_thesis/0201240296053.html 【相关文献】

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