健康人补体受体1基因单核苷酸多态性位点与其红细胞表
面分子水平的相关性
胡金川1，田亚平2，刘丽丹3，温新宇2，王玲2，高艳红2，田卫东1，张立敏1，陈松楠1
【摘 要】摘要:目的 探讨健康人补体受体1(complement receptor type 1，CR1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNP)位点与红细胞表面CR1分子水平的相关性。方法 采用多重PCR-荧光标记单碱基延伸-标签微阵列杂交基因分型技术，检测215例受试者CR1基因5个标签SNP，并采用流式细胞术测定其中81例样本红细胞CR1分子水平。采用Arlequin 3.11软件对各SNP位点基因型频率进行哈温平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)检验，采用SPSS 13.0软件对健康人CR1基因SNP位点基因型及等位基因分布的性别差异、不同基因型人群红细胞CR1分子水平差异和影响红细胞CR1分子水平的单因素和多因素进行统计学分析。结果 健康人CR1基因SNP位点基因型及等位基因分布性别间的差异无统计学意义(P＞0.05);健康人红细胞CR1几何平均荧光强度比值(the geometric mean fluorescence intensity ratio of CR1，CR1-GMFIR)为3.36±1.26。rs11118167T＞C和rs9429945C＞T位点各基因型组对应的红细胞CR1分子水平总体比较，差异具有统计学意义(分别为P＜0.01和P＜0.05)，两两比较时，rs11118167T＞C位点TC、CC基因型携带者低于TT基因型者，rs9429945C＞T位点CT、TT基因型携带者低于CC基因型者(P值均＜0.01)。在年龄、性别、5个标签SNP位点各基因型中，CR1-GMFIR与rs4844600G＞A(GG/GA/AA)、rs9429945C＞T(CC/CT/TT)、rs11118167T＞
C(TT/TC/CC)均呈负相关(分别为P＜0.05，P ＜0.01，P＜0.01)，影响 CR1-GMFIR 的最主要因素为 rs11118167T＞C(P ＜0.01)，其次为 rs9429945C ＞T(P ＜0.01)。结论 rs11118167T＞C和rs9429945C＞T是红细胞CR1分子水平的主要影响因素。
【期刊名称】标记免疫分析与临床 【年(卷),期】2015(022)008 【总页数】5
【关键词】关键词:补体受体1; 单核苷酸多态性; 分子水平; 红细胞免疫; 关联研究
自1981年Siegel提出“红细胞免疫系统”概念后，红细胞具有免疫功能被广泛证实和普遍接受。其中补体受体1(CR1)赋予红细胞的免疫黏附功能是红细胞行使其他免疫功能的基础，在红细胞免疫中占有极其重要的地位。现已证实，红细胞CR1分子水平低下与肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病等多种疾病发生发展密切相关［1］。但对CR1基因SNP位点的特点及其与红细胞CR1分子水平的相关性尚未见相关报道。本研究探讨了5个标签SNP位点等位基因、基因型的分布特点，分析了影响健康人红细胞CR1分子水平的主要因素。
材料与方法
1 研究对象
215例经规范体格检查确认各脏器功能正常、无现病史的健康人，男96例，女119例，平均年龄39.7±12.6岁。检测215例受试者CR1基因5个标签SNP，并采用流式细胞术测定其中81例(男36例，女45例，平均年龄
44.3±12.0岁)红细胞表面CR1分子水平。 2 主要试剂和仪器
采用美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪及美国R＆D公司藻红蛋白(PE)标记鼠IgG1κ和鼠抗人CR1单克隆抗体检测CR1分子水平。采用美国贝克曼公司GenomeLabTMSNPstream?基因分型系统、SNPware杂交板及延伸反应、杂交反应试剂，美国Promega公司Wizard?基因组DNA纯化试剂盒、瑞士罗氏公司 Amplitaq Gold(5U/μL)、日本 Takara公司dNTPs等试剂检测CR1基因标签SNP。 3 实验方法
采集受试者清晨空腹静脉血2mL至EDTA-2K抗凝管，混匀。6 h内测定红细胞CR1分子水平、提取基因组DNA。
3.1 红细胞CR1分子水平测定 将EDTA-2K抗凝全血以2180×g离心7 min，从红细胞层中部吸取红细胞10 μL，用 PBS稀释至1×105 个/μL;设同型对照(阴性对照)管和测试管，分别加藻红蛋白标记鼠IgG1κ同型对照和鼠抗人CR1单克隆抗体各7 μL，然后每管分别加入50 μL PBS和5 μL稀释红细胞，混匀;室温避光反应30 min;每管中加入750 μL PBS，摇匀，红细胞悬液移入1.5 mL EP管，1110×g离心5 min;弃上清，沉淀中加入300 μL PBS，重悬红细胞，避光，即刻用FACS Calibur流式细胞仪测试。采用Cell Quest软件分析数据，结果以CR1几何平均荧光强度比值(geometric mean fluorescence intensity ratio，GMFIR)表示(GMFIR=测试管GMFI/同型对照管GMFI)。 3.2 CR1基因标签 SNP检测［2］ ① 采用Wizard?基因组DNA纯化试剂盒提取人外周血基因组DNA;②DU800紫外分光光度计测定DNA纯度及浓度;③
健康人补体受体1基因单核苷酸多态性位点与其红细胞表面分子水平的相关性
