健康人补体受体1基因单核苷酸多态性位点与其红细胞表
面分子水平的相关性
胡金川1,田亚平2,刘丽丹3,温新宇2,王玲2,高艳红2,田卫东1,张立敏1,陈松楠1
【摘 要】摘要:目的 探讨健康人补体受体1(complement receptor type 1,CR1)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点与红细胞表面CR1分子水平的相关性。方法 采用多重PCR-荧光标记单碱基延伸-标签微阵列杂交基因分型技术,检测215例受试者CR1基因5个标签SNP,并采用流式细胞术测定其中81例样本红细胞CR1分子水平。采用Arlequin 3.11软件对各SNP位点基因型频率进行哈温平衡(Hardy-Weinberg equilibrium,HWE)检验,采用SPSS 13.0软件对健康人CR1基因SNP位点基因型及等位基因分布的性别差异、不同基因型人群红细胞CR1分子水平差异和影响红细胞CR1分子水平的单因素和多因素进行统计学分析。结果 健康人CR1基因SNP位点基因型及等位基因分布性别间的差异无统计学意义(P>0.05);健康人红细胞CR1几何平均荧光强度比值(the geometric mean fluorescence intensity ratio of CR1,CR1-GMFIR)为3.36±1.26。rs11118167T>C和rs9429945C>T位点各基因型组对应的红细胞CR1分子水平总体比较,差异具有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05),两两比较时,rs11118167T>C位点TC、CC基因型携带者低于TT基因型者,rs9429945C>T位点CT、TT基因型携带者低于CC基因型者(P值均<0.01)。在年龄、性别、5个标签SNP位点各基因型中,CR1-GMFIR与rs4844600G>A(GG/GA/AA)、rs9429945C>T(CC/CT/TT)、rs11118167T>
C(TT/TC/CC)均呈负相关(分别为P<0.05,P <0.01,P<0.01),影响 CR1-GMFIR 的最主要因素为 rs11118167T>C(P <0.01),其次为 rs9429945C >T(P <0.01)。结论 rs11118167T>C和rs9429945C>T是红细胞CR1分子水平的主要影响因素。
【期刊名称】标记免疫分析与临床 【年(卷),期】2015(022)008 【总页数】5
【关键词】关键词:补体受体1; 单核苷酸多态性; 分子水平; 红细胞免疫; 关联研究
自1981年Siegel提出“红细胞免疫系统”概念后,红细胞具有免疫功能被广泛证实和普遍接受。其中补体受体1(CR1)赋予红细胞的免疫黏附功能是红细胞行使其他免疫功能的基础,在红细胞免疫中占有极其重要的地位。现已证实,红细胞CR1分子水平低下与肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、肝脏疾病、肾脏疾病等多种疾病发生发展密切相关[1]。但对CR1基因SNP位点的特点及其与红细胞CR1分子水平的相关性尚未见相关报道。本研究探讨了5个标签SNP位点等位基因、基因型的分布特点,分析了影响健康人红细胞CR1分子水平的主要因素。
材料与方法
1 研究对象
215例经规范体格检查确认各脏器功能正常、无现病史的健康人,男96例,女119例,平均年龄39.7±12.6岁。检测215例受试者CR1基因5个标签SNP,并采用流式细胞术测定其中81例(男36例,女45例,平均年龄
44.3±12.0岁)红细胞表面CR1分子水平。 2 主要试剂和仪器
采用美国BD公司FACS Calibur流式细胞仪及美国R&D公司藻红蛋白(PE)标记鼠IgG1κ和鼠抗人CR1单克隆抗体检测CR1分子水平。采用美国贝克曼公司GenomeLabTMSNPstream?基因分型系统、SNPware杂交板及延伸反应、杂交反应试剂,美国Promega公司Wizard?基因组DNA纯化试剂盒、瑞士罗氏公司 Amplitaq Gold(5U/μL)、日本 Takara公司dNTPs等试剂检测CR1基因标签SNP。 3 实验方法
采集受试者清晨空腹静脉血2mL至EDTA-2K抗凝管,混匀。6 h内测定红细胞CR1分子水平、提取基因组DNA。
3.1 红细胞CR1分子水平测定 将EDTA-2K抗凝全血以2180×g离心7 min,从红细胞层中部吸取红细胞10 μL,用 PBS稀释至1×105 个/μL;设同型对照(阴性对照)管和测试管,分别加藻红蛋白标记鼠IgG1κ同型对照和鼠抗人CR1单克隆抗体各7 μL,然后每管分别加入50 μL PBS和5 μL稀释红细胞,混匀;室温避光反应30 min;每管中加入750 μL PBS,摇匀,红细胞悬液移入1.5 mL EP管,1110×g离心5 min;弃上清,沉淀中加入300 μL PBS,重悬红细胞,避光,即刻用FACS Calibur流式细胞仪测试。采用Cell Quest软件分析数据,结果以CR1几何平均荧光强度比值(geometric mean fluorescence intensity ratio,GMFIR)表示(GMFIR=测试管GMFI/同型对照管GMFI)。 3.2 CR1基因标签 SNP检测[2] ① 采用Wizard?基因组DNA纯化试剂盒提取人外周血基因组DNA;②DU800紫外分光光度计测定DNA纯度及浓度;③
健康人补体受体1基因单核苷酸多态性位点与其红细胞表面分子水平的相关性
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