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检验操作规程
题目：陈皮原药材检验操作规程 编号：TS-GC-YL-20500-02 制定人： 制定日期2020 年 月 日 版本：2 页数：1/3 审核人： 审核日期2020 年 月 日 颁发部门：质 量 部 批准人： 批准日期2020年 月 日 生效日期2020 年 月 日 目的：规范陈皮原药材检验操作 范围：陈皮原药材检验 分发部门： 质量部、 化验室、生产部 标 题 正 文 1 标准依据：《中国药典》2020年版一部及四部 2 【性状】 2.1 仪器：直尺。 2.2 方法：取本品,置日光下观察,并用直尺测量:陈皮 常剥成数瓣，基部 相连，有的呈不规则的片状，厚1～4mm。外表面橙红色或红棕色，有细皱纹和凹下的点状油室；内表面浅黄白色，粗糙，附黄白色或黄棕色筋络状 维管束。质稍硬而脆。气香，味辛、苦。 广陈皮 常3瓣相连，形状整齐，厚度均匀，约1mm。外表面橙黄色 至棕褐色点状油室较大，对光照视，透明清晰。质较柔软。 【鉴别】 3 （1）显微鉴别 3.1 仪器与试剂：生物显微镜、酒精灯，水合氯醛、稀甘油等。 3.1.1 方法：取本品适量，用水合氯醛装片，置显微镜下观察：（1）本品粉 3.1.3 末黄白色至黄棕色。中果皮薄壁组织众多，细胞形状不规则，壁不均匀增 厚，有的成连珠状。果皮表皮细胞表面观多角形、类方形或长方形，垂周 壁稍厚，气孔类圆形，直径18～26μm，副卫细胞不清晰；侧面观外被角质 层，靠外方的径向壁增厚。草酸钙方晶成片存在于中果皮薄壁细胞中，呈 多面体形、菱形或双锥形，直径3～34μm，长5～53μm，有的一个细胞内 含有由两个多面体枸成的平行双晶或3～5个方晶。橙皮苷结晶大多存在于 薄壁细胞中，黄色或无色，呈圆形或无定形团块，有的可见放射状条纹。 螺纹导管、孔纹导管和网纹导管及管胞较小。 （2）薄层鉴别 3.2 3.2.1 仪器与试剂：分析天平、数显恒温水浴锅、电热鼓风干燥箱、层析缸、硅胶G薄层板、乙酸乙酯、甲苯、甲酸、甲醇等。 方法：（2）取本品粉末0.加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，取3.2.2 滤液5ml，浓缩至lml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成 饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述 两种溶液各2R，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上， 以乙酸乙酯-甲醇-水（100:17:13）为展开剂，展至约3cm，取出，晾干， 再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20：10：1：1）的上层溶液为展开剂，展至 约8cm，取岀，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。 供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 （3）另取2-甲氨基苯甲酸甲酯对照品，加甲醇制成每1ml含0.lmg的3.3 溶液，作为对照品溶液，再取广陈皮对照提取物，加甲醇超声处理20分钟，
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4 4.1 制成每1ml含15mg的溶液，作为对照提取物溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液及〔鉴别〕（2）项下的供试品溶液各2Q，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（10：4：2：0.5）10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展至约5cm，取出，晾干，再以环己烷为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，置紫外光灯（365mn）下检视。供试品色谱中，在与对照提取物色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点（广陈皮） 【检查】 水分 不得过12.0%（通则0832第四法）。 4.1．1 仪器：甲苯法仪器装置、分析天平、粉碎机、药筛等。 4.1.2 4.1.3 方法：取供试品适量（约相当于含水量1～4ml），精密称定，置A瓶中，加甲苯约200ml，必要时加入干燥、洁净的无釉小瓷片数片或玻璃珠数粒，连接仪器，自冷凝管顶端加入甲苯至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。检读水量，并计算成供试品的含水量（％）。 计算公式： X= V?100% M式中：v代表检测水量的体积 M代表供试品重量 4.2 黄曲霉毒素 照真菌毒素测定法（通则2351）测定。 本品每1000g含黄曲霉毒素B1不得过5μg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1的总量不得过10μg。 4.2.1 仪器与试剂：光化学衍生器、离心机、荧光检测器检测等 本法系用高效液相色谱法（通则0512）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒 素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总
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4.2.2 4.2.3
量计），除另有规定外，按下列方法测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm（或365nm），发射波长λex=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。 混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。 供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μ1、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～25μ1，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量，计算，即得。 计算公式：X=(A供?b)?f?1000k?M样?V第 3 页 共 6 页
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4.3 4.3.1 4.3.2 4.3.3 5 5.1.1 5.1.2
二氧化硫残留量：照二氧化硫残留量测定法（通则 2331)测定，不得过150mg/kg 仪器与试剂：两颈圆底烧瓶、电热套、竖式回流冷凝管、磁力搅拌器、分析天平、甲基红乙醇溶液指示剂、氢氧化钠滴定液滴、盐酸溶液（6mol/L)等。 方法：测定法取药材或饮片细粉约10g(如二氧化硫残留量较髙，超过1000mg/kg，可适当减少取样量，但应不少于5g),精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水300?400ml。打开回流冷凝管开关给水，将冷凝管的上端二氧化硫气体导出口处连接一橡胶导气管置于100ml锥形瓶底部。锥形瓶内加入3%过氧化氢溶液50ml作为吸收液（橡胶导气管的末端应在吸收液液面以下）。使用前，在吸收液中加人3滴甲基红乙醇溶液指示剂（2.5mg/ml),并用0.Olmol/L氢氧化钠滴定液滴定至黄色（即终点；如果超过终点，则应舍弃该吸收溶液）。开通氮气，使用流量计调节气体流量至约0.2L/min；打开分液漏斗的活塞，使盐酸溶液（6mol/L)10ml流入蒸馏瓶，立即加热两颈烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸；烧瓶内的水沸腾1.5小时后，停止加热。吸收液放冷后，置于磁力搅拌器上不断搅拌，用氢氧化钠滴定（O.Olmol/L)滴定，至黄色持续时间20秒不褪，并将滴定的结果用空白实验校正。 计算公式： （V供-V空）×C×0.032×106 二氧化硫残留量（mg/kg） = W供 式中： V供为供试品溶液消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； V空 为空白消耗氢氧化钠滴定液的体积，ml； C 为氢氧化钠滴定液的浓度，mol/L； W供为供试品的重量，g。 0.032为lml氢氧化钠滴定液（lmol/L)相当的二氧化硫的质量，g。 【含量测定】 照高效液相色谱法（通则0512）测定。本品按干燥品计算，含橙皮苷不得少于3.5%。 仪器与试剂：电子分析天平、高效液相色谱仪、甲醇、醋酸、石油醚（60～90℃）等。 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（22:78）为流动相；检测波长为283nmo理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品粗粉（过二号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W；频率40kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5以，注入液相色谱仪， 第 4 页 共 6 页
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5.1.3 5.2.1 测定，即得。 本品按干燥品计算，含橙皮苷（C28H34O15）不得少于3.5%。 计算公式： A样 × C对 ×f 含量% = ×100% m ×（1－水分）×A对 式中： A样 ------------------------- 样品的面积。 A对 ------------------------ - 对照品的面积。 C对 ------------------------- 对照品的浓度(mg/ml)。 m ------------------------- 样品的重量（g）。 f ------------------------- 稀释体积。 广陈皮照高效液相色谱法（通则0512）测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；橙皮苷检测波长为283nmJI|陈皮素和橘皮素检测波长为330nmo理论板数按橙皮苷峰和川陈皮素峰计算均应不低于2000 对照品溶液的制备取橙皮苷对照品、川陈皮素对照品、橘皮素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含橙皮苷0.2mg、川陈皮素25隅、橘皮素15fig的混合溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粗粉（过二号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5以，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品按干燥品计算，含橙皮苷（C28H34015）不得少于2.0%；含川陈皮5.2.2
素（C21H22O8）和橘皮素（C20H20O7）的总量，不得少于0.42% 计算公式： 第 5 页 共 6 页
YL-20500陈皮原料检验操作规程
