细胞培养@原代细胞培养操作

原代细胞培养操作

取材：

1． 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。

2． 把整个孕鼠浸入盛有75％乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出

后放在大平皿中携入超净台。

3． 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌

镊子将皮肤扯向后腿。

4． 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，

置于无菌的培养皿上。

5． 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将

胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。用平衡盐溶液漂洗胚胎至清洗液清亮。

切割（2人一组）：

6． 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。 7． 然后用眼科手术剪刀小心地反复剪切胚胎，直到成1mm3

左右的小块，再用平衡盐溶液清洗组织块至清洗液清亮。 8． 静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。

消化、接种培养（2人一组）：

9． 视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液（约3ml），37℃

中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次。

10． 静置，吸去上清，加2ml细胞生长液，用吸管反复吹打组织块，使细胞分离，静置，使未分散的组织块下沉。 11． 取部分细胞悬液接种至加了细胞生长液（约3ml）的培养

瓶中（若计数，按每细胞瓶1x 106细胞的数量接种），置于37℃，二氧化碳培养箱中培养。培养3～5天观察结果。