新乡医学院分析化学实验课教案首页
授课教师姓名及职称:
一、实验名称 二、授课对象 维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定 药学 1.掌握分光光度计的使用方法 授课形式 实验教学 三、教学目标 2.掌握注射剂含量的测定和计算方法 3.熟悉测绘吸收曲线的一般方法 1.吸收曲线的绘制方法 四、教学内容 2.应用吸光系数法测定注射剂含量及计算方法 3.752型紫外-可见分光光度计的使用方法 五、教学安排 与课时分配 1.讲解演示 40 min 2.学生操作 教师辅导 120min 六、授课重点 1.吸收曲线的绘制方法 2.752型紫外-可见分光光度计的使用方法 1.752型分光光度计光源的使用 七、注意事项 2.每次改变波长,需重新调T为“0” 3.B12应避光 八、授课方法 九、使用教材 十、教研室 审查意见 教师示范讲述,学生操作 《分析化学实验》自编教材 主任签字 新乡医学院化学教研室 年 月 日
实验 维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定
一、实验目的
1. 掌握分光光度计的使用方法; 2. 掌握注射剂含量的测定和计算方法; 3. 熟悉测绘吸收曲线的一般方法。
二、实验原理
维生素B12是含Co的有机化合物,其注射液为粉红色至红色的澄明液体。要测定B12注射液的含量,可以用紫外-可见分光光度法测定,用此法进行含量测定,必须知道B12的λmax,λmax可以通过绘制吸收曲线来得到。
吸收曲线:将不同波长的单色光依次通过被分析的物质,分别测得不同波长下的吸光度,以波长为横坐标,以吸光度为纵坐标所描绘的曲线。吸光度最大时对应的波长为λmax,在λmax处测吸光度。B12在278,361,550nm处有最大吸收,在λmax处测得A,根据吸光系数法可以求出注射液中B12的含量。
吸光系数法:A=Ecl
实验中要求测361nm处的A,相应的吸光系数E1cm为207。
1%三、仪器与试剂
752型紫外-可见分光光度计,10mL容量瓶,5mL吸量管;0.1g·L-1维生素B12水溶液,维生素B12注射液(市售品)。
四、实验步骤
1.752型分光光度计的使用
(1)开启电源开关,使仪器预热20分钟。 (2)用波长选择旋钮设置所需的分析波长。
(3)将装参比溶液的比色皿置于光路,打开样品室盖,调节T旋钮,使显示器指针指在“%”。 (4)将装参比溶液的比色皿置于光路,关闭样品室盖,调节A旋钮,使显示器指针指在“%”。 (5) 重复操作(3)和(4),直至仪器显示稳定。
(6)将装参比溶液的比色皿置于光路,关闭样品室盖,进行测定,在显示器上读出A。
(7)仪器使用完毕,关闭电源,拔下电源插头。取出比色皿,洗净、晾干。复原仪器,盖上防尘罩。 2.吸收曲线的绘制
将0.1g·L-1维生素B12溶液置于1cm比色皿中,以蒸馏水为空白溶液,在不同波长(340nm~580nm之间,其
中从350nm~370nm和540~560nm每间隔5nm测量一次,其余每间隔20nm测量一次吸光度)下测量相应的吸光度。然后以波长为横坐标,吸光度为纵坐标绘出吸收曲线。从吸收曲线上得到最大吸收波长,从而选择测定维生素B12的适宜波长。
3.注射液含量测定
避光操作。准确吸取维生素B12注射液于10ml容量瓶中,加水定容至刻度线。然后将溶液置于1cm比色皿中,在361nm波长条件下以蒸馏水作为空白测定吸光度,按C63H88CoN14O14P的吸收系数生素B12标示量的百分含量。
计算公式:
A1??稀释倍数1á100VB12标示量%=cm?100%标示量(g/mL)
á1cm为207计算维
五、注意事项
1.在每次测定前,首先应做吸收池配套性试验。即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液,在所选波长处测定各比色皿的透光率,其最大误差?T应不大于%。
2.仪器在不测定时,应随时打开暗箱盖,以保护光电管。
3.为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致,需用原溶液荡洗比色皿2~3次。
4.比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。过满溶液可能溢出,使仪器受损。使用后应立即取出比色皿,并用自来水及蒸馏水洗净,倒立晾干。
5.比色皿一般用水荡洗,如被有机物污染,宜用HCl-乙醇(1+2)浸泡片刻,再用水冲洗,不能用碱液或强氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗,以免损伤比色皿。
6.λ<350nm时使用氢灯,λ>350nm时使用钨灯。
六、思考题
1.单色光不纯对于测得的吸收曲线有什么影响
2.利用邻组同学的实验结果,比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线有无不同。试作解释。