MDR1 基因单靶点双荧光素酶报告基因系统的建立

MDR1 基因单靶点双荧光素酶报告基因系统的建立

李长龙;萨晓婴

【期刊名称】《中国比较医学杂志》 【年(卷),期】2008(018)009

【摘要】目的 通过构建以MDR1启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统并进行活性分析,为MDR1基因表达的单靶点调控研究和逆转剂的筛选提供一种有效的方法.方法 从HCT-8细胞中提取DNA并克隆含有MDR1基因启动子中Y-box序列.将该序列重组到萤光素酶报告基因载体pGL-3-Basic的启动区域中,从而构建报告基因载体pGL-MDR1.将pGL-MDR1和pRL-TK载体共转染到HCT-8和HCT-8/VCR细胞中.通过调节不同载体的比例来优化转染效率.利用MDR1基因激活剂(热诱导)和抑制剂(EGCG)等处理来分析其启动转录活性受外界因素的影响.结果 通过直接测序法验证了pGL-MDR1含有MDR1基因启动子Y-box序列且没有出现碱基突变.在pGL-MDR1和pRL-TK的转染比例为5:5时,转染效率最高并具有最高的萤光素酶活性.通过MDR1基因激活处理后表现为时间依赖性地激活MDR1基因的表达,而MDR1基因抑制剂的作用则相反.结论 MDR1启动子为启动序列的双荧光素酶报告基因系统建立成功.该系统不但可以用于研究活体生物发光成像和MDR1基因表达的机理,而且可用于单靶点的多药耐药抑制剂的筛选. 【总页数】4页(28-31)

【关键词】MDR1;启动子;荧光索酶报告基因;活性鉴定 【作者】李长龙;萨晓婴

【作者单位】浙江省医学科学院,浙江省实验动物中心,浙江省实验动物与安全性