siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究
胡修忠1，程 蕾1，余 婕1，向 敏1，夏 瑜1，陶弼菲1，周 源1，王定发1*，熊海谦2
【摘 要】为探讨核因子E2相关因子(nuclear factor E2 related factor，Nrf2)基因沉默及激活后对牛子宫内膜上皮细胞的影响，本试验利用小分子干扰(siRNA)技术及Nrf2的激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)，分别从Nrf2基因的下调和上调表达来研究Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和Homebox A10(HOXA10)基因表达的影响。结果显示，经实时荧光定量PCR方法检测，在设计的2条siRNA序列(siRNA-1209和siRNA-1672)中，siRNA-1672在终浓度为75 nmol/L、作用时间24 h时抑制效果较好，抑制效率在80%以上；经Western blotting方法检测，Nrf2蛋白表达水平在转染后96 h极显著下降(P<0.01)，而HO-1和HOXA10的mRNA表达量分别下降了60%和70%(P<0.01)，蛋白表达量在96 h后极显著或显著下降(P<0.01；P<0.05)。此外，经CCK8方法检测，Nrf2基因表达沉默后，牛子宫内膜上皮细胞增殖能力减弱。而在tBHQ激活Nrf2试验中，经Western blotting方法检测，tBHQ终浓度为30 μmol/L时Nrf2蛋白表达量最高，极显著高于对照组(P<0.01)，且HO-1和HOXA10的蛋白表达量与对照组相比也明显上升。结果表明，本试验设计的siRNA-1672能特异性地抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2的表达，而抑制Nrf2的表达会导致牛子宫内膜上皮细胞增殖能力下降，且Nrf2对牛子宫内膜上皮细胞HO-1和HOXA10基因表达存在调控作用。 【期刊名称】中国畜牧兽医 【年(卷),期】2019(046)006
siRNA抑制牛子宫内膜上皮细胞Nrf2基因的表达研究
