高中生物选修一
第5课时 微生物的实验室培养(二)
[学习导航] 1.通过阅读教材P16～17“(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”，掌握配制培养基的步骤和倒平板操作的过程。2.结合教材P18～19“(二)纯化大肠杆菌”，理解并掌握利用平板划线法和稀释涂布平板法来纯化微生物的方法。
[重难点击] 1.掌握制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法。2.学会用平板划线法和稀释涂布平板法纯化微生物。
一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
牛肉膏蛋白胨固体培养基是细菌培养中常用的一种培养基，大肠杆菌的纯化就是用的该培养基。
1．牛肉膏蛋白胨培养基的成分及各成分提供的营养
培养基组分 牛肉膏5.0 g 蛋白胨10.0 g NaCl 5.0 g 蒸馏水定容至1 000 mL
2.制备步骤 (1)培养基的配制
计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基_____的比例，计算配制100 mL培养基时各成分的用量 ↓
0.5 g牛肉膏：比较黏稠，用 称取??1 g ：易吸潮，要 ?牛肉膏也是?称量?0.5 g NaCl
??2 g ↓
提供的主要营养物质 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 碳源、氮源和维生素 无机盐 氢元素、氧元素
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牛肉膏和称量纸＋水
? ↓加热溶化后取出称量纸?加蛋白胨和NaCl
溶化? ↓微火加热、不断搅拌
溶解后加 ?需不断用玻棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂?? ↓
?熔化后，补加蒸馏水至 mL
↓
：1 moL的NaOH、pH试纸，将pH调为7.4 ～7.6 ↓
______：趁热分装到洁净锥形瓶中 ↓
加棉塞：用棉花不用脱脂棉，脱脂棉吸水 ↓
包扎：外包______纸，且挂标签
??①培养基： 灭菌
(2)灭菌?
?②培养皿： 灭菌?
(3)倒平板
①将______的培养皿放在______的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。 ②右手拿锥形瓶，使瓶口__________。
③用左手将培养皿打开一条__________的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。
④等待平板冷却凝固后，将平板____________。
1．填表比较溶化时两次使用玻棒搅拌的目的
操作 往烧杯中加入蛋白胨和氯化钠后用玻棒搅拌 加入琼脂，加热使其熔化的过程中使用玻棒搅拌
2.倒平板时的注意事项
(1)培养基灭菌后，需要冷却至50 ℃左右时，才能倒平板的原因是什么？你用什么办法来估计培养基的温度？
搅拌的目的 2
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(2)分析下图，回答①、②问题：
①为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
②从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么？
(3)怎样判断制备的培养基是否合格、成功，是否受到污染？
1．某学校开展大肠杆菌培养活动，首先对实验室进行清扫和消毒处理，然后准备各种原料和用具。请回答下列问题：
(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：_____________________________________________________________。 (2)微生物在生长过程中对各种成分需求量不同，配制培养基时各成分要有合适的________。在烧杯中加入琼脂后要不停________，防止______________________。
(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入______________中灭菌。灭菌完毕后拔掉电源，待压力表的压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应____________。
2．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是( )
①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 ③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 ④用左手的拇指和食指完全打开皿盖 ⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 ⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A．①③④⑤ C．③⑤
B．④⑤⑥ D．①②④⑥
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问题导析 (1)培养基灭菌后，需冷却至______左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。
(2)倒平板的过程要在____________附近进行。 一题多变
倒平板的过程需要进行无菌操作，在培养基的制备过程中，还有哪些环节需要进行无菌操作？ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。
二、微生物的分离与纯化技术
1．纯化大肠杆菌 (1)平板划线法
①原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面_______的操作，将聚集的菌种逐步_______到培养基的表面。 ②步骤
接种环灭菌：将接种环放在酒精灯火焰上灼烧直至烧红 ↓
?? 试管的
取菌种?b.将试管口通过 达到消灭试管口杂菌的目的
c.将已 的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液??d.将试管口 ，并塞上棉塞
↓
a.在酒精灯 冷却接种环，并打开盛有菌液的
? 接种环迅速伸入平板内，划 条平行线，?
盖上皿盖。注意 。
平板?b.灼烧接种环，待其冷却后，从第一划线? 区域 开始往第二区域
? 内划线。重复以上操作，完成三、 四、五区域内划线。注意不要将最?? 后一区的划线与 相连
↓
培养：将平板 ，放入培养箱中培养 ?2?稀释涂布平板法
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a.左手将皿盖打开一条缝隙，右手把沾有菌种的
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①原理：将菌液进行一系列的 ，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 ②步骤
Ⅰ.系列稀释操作
a.编号为101～106试管中分别盛有 水。
b.用移液管吸取 培养的菌液，注入101倍稀释的试管中，得到稀释菌液。
c.从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中。依次类推，完成菌液的稀释。
注意 移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成。 Ⅱ.涂布平板操作
涂布器消毒：将涂布器浸在盛有 的烧杯中 ↓
取菌液：取少量菌液滴加到 表面 ↓
涂布器灭菌：将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，
8～10 s
↓
涂布平板：用涂布器将 均匀涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，
使菌液分布均匀
2．菌种保藏 比较项目 适用范围 培养基 保藏温度 具体方法
临时保藏 __________的菌种 __________培养基 4 ℃ 接种到固体斜面培养基上→适宜温度下培养→____冰箱中保藏 甘油管藏 ______的菌种 ______培养基 －20 ℃ 甘油瓶中装入甘油后______→将菌液转移至甘油瓶中→混匀后冷冻箱中保存 5
高中生物选修1精品学案：2.1 微生物的实验室培养(二)
