将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。
将试管直立，置低温或室温下保存。
此法实用且效果较好。霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏1－2年，普通细菌也可保藏1年左右。 3、穿刺保藏法
按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4℃冰箱存放。
4、砂土管保藏法 (1)河砂处理
取河砂若干加入盐酸10%，加热煮沸30min除去有机机质。倒去盐酸溶液，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸镏水冲洗，烘干后用40目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。
(2)土壤处理
取非耕作层不含腐殖质的痩黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。烘干后碾碎，用100目筛子过筛，粗颗粒部分丢掉。 (3)砂土混合
处理妥当的河砂与土壤按3：1的比例掺合(或根据需要而用其他比例，甚至可全部作砂或土)均匀后，装入10x100mm的小试管或安瓿管中，每管分装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌(通常采用间歇灭菌2--3次)，最后烘干。 (4)无菌检查
每10支砂土管随机抽1支，将砂土倒入肉汤培养基中，30℃培养40h，若发现有微生物生长，所有砂土管则需重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌后方可使用。 (5)菌悬液的制备
取生长健壮的新鲜斜面菌种，加入2-3ml无菌水(每18x180mm的试管斜面菌种)，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成菌悬液。 (6)分装样品
每支砂土管(注明标记后)加入0．5ml菌悬液(刚刚使砂土润湿为宜)，用接种针拌匀。 (7)干燥
将装有菌悬液的砂土管放入干燥器内，干燥器底部盛有干燥剂。用真空泵抽干水分后火焰封口(也可用橡皮塞或棉塞塞住试管口)。
(8)保存
置4℃冰箱或室温干燥处，每隔一定的时间进行检测。此法多用于产芽孢的细菌、产生孢子的霉菌和放线菌。在抗生素工业生产中应用广泛、效果较好，可保存几年时间，但对营养细胞效果不佳。 5、冷冻真空干燥法
（1）冻干管的准备：中性硬制玻璃，烘干，灭菌。 （2）菌种培养：细菌芽孢脱落；放，霉孢子丰满。 （3）保护剂的配制：配制，灭菌，检查。 （4）菌悬液的制备：2-3ml保护剂。 （5）分装样品：菌悬液每管0.2ml。 （6）预冻：程序控温仪降温。 （7）冷冻真空干燥：-50℃下抽真空。 （8）取出样品：轻敲松散即达标。 （9）第二次干燥。 （10）熔封。
（11）存活性检测：抽取一管进行存活性检查。 （12）保存：4℃保存。
【高中生物】菌种保存和微生物常识
