α干扰素-2bH is58的分子构建、表达及纯化

α干扰素-2bH is58的分子构建、表达及纯化

王秀;刘金毅;牛晓霞;杨轶;金颖;彭秀娟;王艳

【期刊名称】《中国医科大学学报》 【年(卷),期】2008(037)005

【摘要】目的 通过定点突变,构建α干扰素-2bHis58(IFNα-2bHis58)),以期获得高效的新型药物分子.方法 采用PCR体外定点突变技术,使α干扰素-2b基因的第58位密码子由GAA突变为CAC.将扩增片段克隆入pET23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3).表达的IFNα-2bHis58经包涵体变复性、DEAE层析和CM层析纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定.结果 IFNα-2bHis58主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后,IFNα-2bHis58的纯度>95%,比活性>3.4×10M8IU/mg.结论 构建了IFNα-2bHis58的表达载体,并成功在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFNα-2bHis58,建立了IFNα-2bHis58的纯化工艺. 【总页数】4页(600-602,606)

【关键词】α干扰素-2b;定点突变;蛋白表达;蛋白纯化;高效 【作者】王秀;刘金毅;牛晓霞;杨轶;金颖;彭秀娟;王艳

【作者单位】中国医科大学,基础医学院生理学教研室,沈阳,110001;北京三元基因工程有限公司,北京,102600;北京三元基因工程有限公司,北京,102600;北京三元基因工程有限公司,北京,102600;北京三元基因工程有限公司,北京,102600;北京三元基因工程有限公司,北京,102600;中国医科大学,基础医学院生理学教研室,沈阳,110001 【正文语种】中文