H P L C法测定黄芩素中黄芩苷的含量
戴宝成（诺和诺德（中国）制药有限公司 天津 300457）
【摘 要】摘要：目的：采用 HPLC 法测定黄芩素中黄芩苷的含量。方法：以 ODS-HG-3（id4.6mm×75mm）为色谱柱，甲醇∶水∶冰醋酸（50∶50∶1）为流动相，检测波长280nm。结果：在此条件下，黄芩苷的进样量在0.15～0.55μg时，与峰面积呈良好的线性关系
（r=0.9999）。平均回收率为99.64%，RSD为1.05%。结论：该方法可作为黄芩素的质量控制手段。
【期刊名称】北方药学【年(卷),期】2015(000)005【总页数】2
【关键词】HPLC黄芩素 黄芩苷 含量测定
黄芩素为唇形科植物黄芩干燥根中黄酮类的总提取物[1]，具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之效[2]。本文以黄芩苷为定量指标，采用HPLC法测定黄芩素中黄芩苷的含量，并进行了方法学研究。
1 材料与方法
1.1 仪器：日本岛津LC-6A高效液相色谱仪，SPD-6AV可见紫外检测器，C-R3A型数据处理机；日本岛津UV-2100紫外分光光度仪。
1.2 色谱条件：色谱柱：ODS-HG-3（id4.6mm×75mm）；流动相：甲醇∶水∶冰醋酸（50∶50∶1）；流速：0.8ml/min；检测波长：280nm；进样量：均为5μl；柱温：室温。1.3 药品与试剂：黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：0715-9707。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为去离子水；样品由天津中新药业提供。
1.4 对照品溶液的配制：精密称取黄芩苷对照品5mg，置100ml量瓶中，加50%的甲醇超声处理30min冷却至室温，并稀释至刻度摇匀 ，即得（每1ml含黄芩苷50μg）。
1.5 样品供试液的配制：取本品约14mg，精密称定，置100ml量瓶中，加50%的甲醇超声处理30min冷却至室温，并稀释至刻度摇匀。精密量取5ml置10ml量瓶中，加50%的甲醇稀释至刻度摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得。
2 检查与测定
2.1 对照品来源及纯度检查：黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所，批号：0715-9707。
按照高效液相色谱法（《中国药典》一部），配置黄芩苷对照品溶液并测定，纯度为99.63%。2.2 定性分析：采用薄层色谱法。据文献[2]取本品适量，加甲醇，制成每1ml含0.2mg的溶液，作为供试品溶液。按照薄层色谱法测试，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。2.3 线性关系考察：精密吸取黄芩苷对照品溶液（浓度为0.05mg/ml）3μl、5μl、7μl、9μl、11μl，进样分析：
①进样量（μg）：0.15、0.25、0.35、0.45、0.55。
②峰面积积分值：32677、57163、83264、106284、132049。
经统计学计算得回归方程：Y=-4465.35+247865X，r=0.9999。说明在0.15～0.55μg之间黄芩苷呈线性关系。
2.4 精密度实验：对照品重复进样每次5μl共5次，测定吸收面积分别为：57163、57479、58196、57680、57895，RSD（%）=0.68%。
2.5 重复性实验：取同一批样品，称取6份，按拟定的含量测定方法，进行提取、分析，测得值为75.43%、75.98%、75.24%、74.72%、74.91%、75.15%，RSD（%）=0.59%。2.6 样品测定：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，进样，结果见表1。
2.7 回收率测定：精密称取黄芩苷含量80.23%的批次样品5份，每份7mg，分别加入浓度为2.80mg/ml黄芩苷对照品溶液各2ml，依含量测定方法提取、测定，计算回收率，结果见表2。2.8 稳定性实验：将制备好的供试品溶液每小时进样1次，供试品溶液的吸收面积基本无变化，结果见表3。
3 讨论
3.1 波长的选择：测定黄芩苷的紫外吸收光谱图，确定为280nm处有最大吸收，故选择此波长为检测波长。
3.2 流动相的选择：选甲醇∶水∶冰醋酸比例50∶50∶1，样品中黄芩苷的分离效果好，保留时间为5min左右。
3.3 文献报道，黄芩苷的含量测定方法有薄层层析法[3]、紫外分光光度法[4]、HPLC-电化学法[5]、RP-HPLC 法[6]等，而用高效液相色谱法测定，操作简便、准确，重现性好。参考文献
[1]天津市卫生局.天津市药品标准[S].天津市卫生局，1990：293.[2]国家药典委员会.中国药典[S].一部，北京：中国科技出版社，2010.
[3]于船，等.黄芩不同炮制品有效成分的薄层层析[J].中国兽医杂志，1986，12（6）：41-43.[4]陈遇英.紫外分光光度法测定辛芩口服液中黄芩苷的含量[J].中成药，1998，20（9）：14-15.[5]何心.HPLC-电化学法测定双黄连粉针中黄芩苷和黄芩素的含量[J].中国中药杂志，1997，22（10）：604-605.
[6]柳文媛，等.RP-HPLC法测定黄芩中黄芩素、汉黄芩素的含量[J].中国药科大学学报，1997，28（3）：162-165.
HPLC法测定黄芩素中黄芩苷的含量
